管花肉苁蓉总苷提取纯化工艺及抗氧剂330合成研究

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肉苁蓉属Cistanche Hoffmgg.et Link系属列当科Orobanchaceae的多年生寄生草本植物,是历史悠久的民间贵重药材。作为补肾、益精血传统中药肉苁蓉,早在20世纪70年代就引起日本学者关注,并系统研究了肉苁蓉植物的化学成分和药理活性,发现苯乙醇苷类化合物是其主要活性成分,具有抗氧化、促进物质代谢、改善学习记忆、增强性功能等作用。   研究发现新鲜植株体内存在的水解酶对苷类化合物,特别是苯乙醇苷类成分具有酶解和破坏作用,使后者含量减少,药材的药效降低。目前一般采用加热灭活酶的方法来抑制酶解和褐变。然而,除此之外,苯乙醇苷成分化学结构稳定性差,易发生酶解和化学水解,在加工和应用时苯乙醇苷损失严重。目前公开的技术只对前者进行了解决,而没有涉及加工过程或制剂应用时因化学环境变化导致的苯乙醇苷分解与氧化的问题。为了更好的开发该产品,本论文从以下五个方面对苯乙醇苷的提取和纯化进行了系统的研究。   第一,采用高效液相色谱法对苯乙醇苷类成分松果菊苷和毛蕊花糖苷进行了含量测定研究。通过采用kromasil色谱柱,以0.5%醋酸水为流动相A,以乙腈为流动相B,流速为0.9mL/min,检测波长310nm,柱温35℃,可以同时测定样品液中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量。   第二,研究了松果菊苷与毛蕊花糖苷在不同pH条件下的稳定性:采用高效液相色谱法,测定在一定温度,不同pH值条件下样品液中松果菊苷和毛蕊花糖苷的浓度,发现在酸性条件下,松果菊苷和毛蕊花糖苷浓度较大;碱性条件下,松果菊苷和毛蕊花糖苷极易被分解破坏;在pH=3时,松果菊苷与毛蕊花糖苷浓度最大,即最稳定。   第三,通过对7种大孔吸附树脂的静态吸附与解吸特性的研究,确定HPD-300树脂是一种理想的吸附剂,该树脂对管花肉苁蓉提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的吸附量均较大,并且易解吸,适宜对肉苁蓉中苯乙醇苷进行提取分离。通过对HPD-300树脂的动态洗脱特性研究,确定上样后先用3-3.5BV的水洗脱除去部分杂质,然后用40%乙醇作为松果菊苷和毛蕊花糖苷的洗脱剂。   第四,以HPD-300大孔吸附树脂作为苯乙醇苷类分离纯化的介质,通过梯度洗脱,获得了良好的分离纯化效果。先用水洗脱除去大部分杂质,再用40%乙醇洗脱,最后用70%乙醇洗脱。放大工艺中40%乙醇洗脱液中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量之和均超过85%,远远超过了国际市场关于肉苁蓉提取物的标准,且回收率也均在90%以上。各组分洗脱液经减压浓缩和干燥称重后,总重量和松果菊苷、毛蕊花糖苷重量均满足重量守恒。本实验研究结果为工业上苯乙醇苷类的富集和纯化提供了参考。   第五,以大孔吸附树脂HPD-300和YMCS-50gel反相硅胶柱为分离纯化介质,用20%乙醇洗脱液多次洗脱,分别对松果菊苷和毛蕊花糖苷进行富集,制得较纯的样品。   第六,建立了一条新的抗氧剂330的合成路线。
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