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[目的](1)通过建立复发性外阴阴道假丝酵母菌病(recurrentvulvovaginal candidiasis,RVVC)的小鼠模型,探索构建复发性外阴阴道假丝酵母菌病小鼠模型的方法。为RVVC的临床治疗提供新的治疗方法奠定模型基础。(2)通过检测小鼠RVVC不同发病阶段阴道局部免疫因子的变化,明确阴道局部免疫在RVVC发病机制中的作用,为进一步了解RVVC的发病机制提供研究依据。[方法](1)运用皮下注射雌激素造成小鼠假发情状态,阴道接种白色念珠菌混悬液,建立外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠模型,之后感染成功的小鼠阴道给予克霉唑阴道片(clotrimazole vaginal tablets,CANESTEN)局部治疗,重复上述感染、治疗过程三次,直到第四次感染成功则判定RVVC小鼠模型构建成功。检测方法主要通过阴道灌洗液镜检(KOH,saline),特定的培养基沙保罗氯霉素培养基(Sabouraud Dextrose Agar,SDA)上培养以及辅以观察RVVC小鼠的外阴变化。(2)运用第一部分构建RVVC小鼠模型的方法来构建RVVC小鼠模型,在四个阶段的每个阶段小鼠感染成功后,用无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)收集小鼠阴道灌洗液,将阴道灌洗液分为3部分,分别用于镜检、培养及酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测在RVVC小鼠造模的四个不同阶段中阴道局部Th1、Th2细胞特异性免疫因子(IL-8,IL-4)的表达情况,之后运用统计学软件SPSS 17.0采用方差分析对实验数据进行统计学分析,以p<0.05为差异显著性标准。[结果](1)在四次感染成功后收集到的小鼠阴道灌洗液镜检可见不同程度假菌丝的形成,培养基培养结果为阳性,即可见有乳白色的白色念珠菌菌落生长,并且小鼠的外阴出现红肿或者于阴道口可见白色分泌物;未感染成功的小鼠阴道灌洗液镜检未见假菌丝以及阴道灌洗液培养结果为阴性,外阴无红肿无分泌物的出现。(2)分析在小鼠造模四个阶段IL-4和IL-8表达量的变化。IL-4在第一阶段(12.22±2.5)和第二阶段(22.29±2.84)的表达有差异,第二阶段IL-4的表达量高于第一阶段并且差异有统计学意义(P<0.05);IL-4在第一阶段(12.22±2.5)和第四阶段(29.39±5.40)的表达也有差异,第四阶段IL-4的表达量高于第一阶段并且差异有统计学意义(P<0.05);IL-8在第一阶段(493.44±68.23)和第三阶段(1104.87±306.85)的表达有差异,第三阶段IL-8的表达量高于第一阶段差异有统计学意义(P<0.05)。除此之外IL-4在第一阶段(12.22±2.5)和第三阶段(43.402±20.19)的表达没有差异,IL-4在第二阶段(22.29±2.84)和第三阶段(43.402±20.19)的表达没有差异,IL-4在第三阶段(43.402±20.19)和第四阶段(29.39±5.40)的表达没有差异。IL-8除了在第一阶段和第三阶段的表达有差异外,其他阶段的表达量相比均没有差异。(3)分析RVVC小鼠造模过程中四个阶段每一个阶段IL-4和IL-8每一个阶段表达量的变化。第一阶段IL-4(12.22±2.5)和IL-8(493.44±68.23)的表达有差异,第一阶段IL-8的表达量高于IL-4的表达量,差异有统计学意义(P<0.05);在第二阶段IL-4(22.29±2.84)和IL-8(989.323±372.296)的表达量也有差异,在第二阶段IL-8的表达量要高于IL-4差异有统计学意义(P<0.05);第三阶段IL-4(43.402±20.19)和IL-8(1 104.87±306.85)的表达水平有差异,在第三阶段IL-8的表达量高于IL-4的表达量,差异有统计学意义(P<0.05);第四阶段IL-4(29.39±5.40)和IL-8(773.231±236.086)的表达有差异,在第四阶段IL-8的表达量高于IL-4且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论](1)通过合理的实验设计,可以成功地构建RVVC小鼠模型。(2)阴道局部免疫参与了RVVC的发病过程,并且在RVVC的发病过程中起重要作用。Th1/Th2共同参与的RVVC的阴道局部免疫,在白色念珠菌感染小鼠后,其阴道中Th1/Th2细胞的比值有变化,其平衡遭到破坏,导致局部的免疫紊乱可能与RVVC发病机制有关。