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消化道肿瘤是人类常见的恶性肿瘤,中国是全世界胃癌、食道癌高发国家,病死率较高。它们已严重地威胁了人类健康。开发有效的治疗方法已成为当今医学研究的重要课题。近年来,胃癌的生物治疗有了较大进展,肿瘤疫苗作为胃癌生物治疗的主要方法正起到越来越重要的作用。研究发现α-1,3-半乳糖基转移酶(α-1,3-GT;α1,3GT)能在肿瘤细胞膜表面合成α-gal表位(Galα1-3Gal-?1- 4GlcNAc-R),从而放大肿瘤细胞TAA的免疫原性,特异性的激发机体的细胞免疫和体液免疫,有望攻克自体肿瘤细胞作为疫苗免疫原性差的难题。本文利用pET-15b表达系统以可溶性形式表达鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域(α1,3GTcd),利用其在人消化道肿瘤细胞表面构建α-gal表位,拟用来制备一种新的自体肿瘤疫苗。本研究首先通过RT-PCR获得鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域的cDNA。进而利用pET-15b载体构建鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域及一小部分连接区的表达体系。然后将质粒转染大肠杆菌E.coli BL21菌株,进一步利用其表达α1,3GTcd。并利用IPTG诱导蛋白的表达。由于目标蛋白含有His-tag,利用镍络合树脂层析纯化鼠源性的α1,3GTcd。用抗his-tag单克隆抗体作为一抗,western blot鉴定鼠源性的α1,3GTcd的表达。然后利用高效液相色谱阴离子交换柱分离、分析酶的底物尿苷二磷酸半乳糖和催化产物尿苷二磷酸以检测酶的活性。通过流式细胞术检测,利用α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域在人的不同消化道肿瘤细胞表面成功地构建了α-gal表位,构建了α-gal表位的肿瘤细胞与自身血清共同孵育,通过台盼蓝染色观察肿瘤细胞的存活情况。统计分析结果,发现自身血清对构建了α-gal表位的肿瘤细胞有杀伤作用。拟通过这种方法达到临床治疗肿瘤的目的。为该方法进入临床研究奠定基础。