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马氏珠母贝是我国生产珍珠的主要贝类之一,广泛分布于我国广东、广西、海南等地,产量非常高,但采珠后的贝肉目前尚未得到有效利用。马氏珠母贝肉中含有丰富的牛磺酸,牛磺酸具有参与渗透压调节、抗氧化、解毒和刺激糖酵解等生理功效,对机体的正常生长发育、中枢神经系统、心血管系统、视觉系统、血液、免疫和生殖系统等有着重要的作用。本研究对马氏珠母贝肉中牛磺酸的提取、纯化与抗急性酒精中毒作用进行了初步探讨,以期实现贝肉的高值化利用。
本研究的主要工作及结果如下:
1.对高效液相色谱测定马氏珠母贝肉中牛磺酸含量的方法进行了研究。结果表明,采用邻苯二甲醛为柱前衍生剂,与原料中的牛磺酸发生衍生化反应后,以甲醇一乙酸钠溶液(体积比40:60)为流动相,使用ODS C<,18>分离柱,FLD检测器(EX=338 nm,EM=444 nm)等色谱条件下检测,牛磺酸的线性范围在2.0~14.0 μg/mL之间,相关系数R<2>为0.9984,回收率为97.9%~103.0%,RSD=2.146%(n=6),检出限为0.77μg(S/N=3),说明该方法能够准确测定马氏珠母贝肉中牛磺酸的含量。
2.对马氏珠母贝肉中牛磺酸的热水提取法、酶解提取法、酶解结合热水提取法等提取方法进行了研究。结果表明,双酶法结合热水提取牛磺酸效果最好,其最佳工艺条件为先用木瓜蛋白酶在温度55℃,酶用量0.6%,液固比6:1条件下酶解4h,升温灭酶待冷却后再加中性蛋白酶,酶用量1.0%,温度55℃,液固比5:1,酶解时间3.5h,双酶酶解后再用100℃热水提取20min,得到提取液牛磺酸含量为6.915μg/mL,比单纯用中性蛋白酶提高了7.3%,比单纯用木瓜蛋白酶提高了4.2%,比只用热水提取提高了9.9%。
3.对马氏珠母贝肉提取液中牛磺酸的纯化条件进行了研究。结果表明,用强酸性阳离子树脂柱分离纯化牛磺酸,上样量20mL,上样pH值5,柱体积110cm<3>,两次洗脱后回收率达到了93.4%,无水乙醇处理牛磺酸收集液,得到白色针状晶体,通过高效液相色谱和红外光谱鉴定,该晶体为天然牛磺酸,纯度为93.3%。
4.对提取纯化得到的天然牛磺酸和马氏珠母贝肉酶解液解酒作用进行了研究。结果表明,56°北京红星二锅头0.16mL/10g为适宜灌胃剂量,与阴性对照相比,天然牛磺酸高剂量组和贝肉酶解液高、中、低剂量组可显著减少发生醉酒的小鼠数目(P<0.05),牛磺酸高、中剂量组和酶解液高、中剂量组均可显著延长小鼠耐受时间,且缩短醉酒维持时间(P<0.05)。天然牛磺酸和马氏珠母贝肉酶解液能极大地降低小鼠血清中乙醇浓度,与对照组相比,贝肉酶解液具有显著效果(P<0.05)。说明天然牛磺酸和贝肉酶解液均具有解酒的作用。
5.通过所建立的动物模型和现代分析手段,对天然牛磺酸和贝肉酶解液的抗急性酒精性肝损伤效果进行了研究。结果表明:与阴性对照相比,贝肉酶解液高、低剂量组能极显著降低小鼠血清AST水平(P<0.01);贝肉酶解液中、低剂量组能极显著降低小鼠血清ALT水平(P<0.01);天然牛磺酸小剂量组和贝肉酶解液中剂量组能极显著降低血清CHOL水平(P<0.01);天然牛磺酸中剂量组和贝肉酶解液小剂量组能显著降低血清CHOL水平(P<0.05);天然牛磺酸中剂量组能极显著降低血清TG水平(P<0.01);同时对各组小鼠肝脏组织切片进行观察,各给药组均能不同程度减轻酒精对肝组织的损伤。因此天然牛磺酸和贝肉酶解液具有抗急性酒精性肝损伤的作用。