肿瘤免疫在过去的一个世纪多中受到了肿瘤学家们的越来越广泛的重视，免疫治疗在过去的几十年间逐渐肿瘤治疗中占有一席之地。肿瘤免疫治疗是通过疫苗、细胞因子、抗体以刺激免疫系统产生抗肿瘤作用，或通过输入免疫细胞来达到抗肿瘤效果。过继性细胞回输治疗是肿瘤免疫治疗的一种，通过体外培养扩增特异性抗肿瘤免疫细胞，然后回输到肿瘤患者体内，从而达到对抗肿瘤的效果。T淋巴细胞包含着三群主要的细胞，CD4+的辅助T细胞（Th），CD8+的细胞毒性T细胞(CTLs)，第三群是一群特殊的T细胞，称为调节性T细胞（T reg），被发现具有抑制免疫的功能。其中，CD8+细胞毒性T细胞被认为是主要的抗肿瘤细胞。近些年来在先后肝细胞癌、恶性黑色素瘤、卵巢癌等肿瘤中发现调节性T细胞的浸润，在患者外周血中数量的增加，表明调节性T细胞与患者较差的预后存在着相关性，有抑制抗肿瘤免疫的作用。同时有研究表明CD8+细胞毒性T细胞的体外培养过程中，调节性T细胞会抑制CD8+细胞毒性T细胞的激活与扩增。免疫监察点是免疫系统中抑制性通路，这些通路在自身耐受起重要作用，并且能够调节外周组织中生理性免疫应答以减少周围组织的损害，例如CTLA-4,PD-1,LAG-3，TIM-3。研究发现免疫监察点分子CTLA-4高表达于调节性T细胞表面，且CTLA-4的表达与调节性T细胞的抑制功能有着密切的相关性。同时免疫监察点分子也表达于抗原提成细胞以及活化的T细胞表面。本实验在CTLs体外培养体系中直接加入抗CTLA-4抗体，来研究阻断免疫监察点分子的是否能够提高过继性免疫细胞中活化T细胞的功能同时抑制调节性T细胞的抑制功能。本实验主要由以下三个部分组成：一、负载MUP53的DC激活特异性T细胞：由外周血单核细胞（PBMCs）经细胞因子诱导成熟的树突状细胞（DCs），并通过腺病毒携带MUP53抗原，感染DCs细胞，通过DCs与分离纯化后的T淋巴细胞共培养以获得针对MUP53的特异性CTLs，同时对获得的CTLs进行活化标志的检测(PD-1, IFN-γ)，证明DCs与T细胞共培养能够获得了特异性的CTLs二、清除调节性T细胞对特异性T细胞体外诱导的影响清除活化前T淋巴细胞中的调节性T细胞，以上述相同方式与成熟的负载MUP53的DCs共培养。检测培养后T细胞中出现CD8+细胞的比例上升，T细胞活化标志PD-1，以及IFN-γ的分泌上升。三、anti-h-CTLA-4抗体对特异性T细胞体外诱导的影响在CTLs体外诱导培养中加入anti-h-CTLA-4抗体，以上述相同方式与成熟的负载MUP53的DCs共培养。检测共培养后细胞增殖变化不明显，T细胞中CD8+/CD4+无明显变化，T细胞活化标志PD-1，以及IFN-γ的分泌上升，调节性T细胞数量及抑制功能下降，以及活化后T细胞对肝癌细胞HepGII的杀伤作用增强。结论：调节性T细胞对体外培养的效应性T细胞的活化有着抑制作用，在培养中加入抗CTLA-4抗体可以减少调节性T细胞数量，抑制其功能的影响，从而增强效应T细胞活化以及杀伤功能。