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急性播散性脑脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis，ADEM)、多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是儿科较多见的脱髓鞘疾病，其病因不明，目前认为属于CD4~+T淋巴细胞介导的以炎性脱髓鞘为特征的一类自身免疫性疾病，其发病过程与实验性自身免疫性脑脊髓炎(experiment autoimmune encephalomyelitis，EAE)相似，对EAE的深入研究，为我们研究这些疾病的发病机制并进一步防治这些疾病提供了实验依据。以往治疗ADEM和MS的方法是应用非特异性免疫抑制剂。多数免疫抑制剂有毒性，除了抑制自身反应性T淋巴细胞功能外，还可以抑制正常淋巴细胞的功能，如免疫监视，免疫防御等。因此，寻找一种毒副作用低，效果特异的治疗方法，成为人们的研究方向。口服抗原耐受是指在口服摄入可溶性蛋白抗原后，外周淋巴细胞中成熟淋巴细胞对口服抗原发生低免疫应答的一种外周耐受。20世纪80年代以来，如何运用这种免疫特性治疗EAE，已受到人们越来越多的关注，而对其机制及影响因素的研究，更成为人们的研究热点。本实验试图探讨口服抗原耐受防治EAE的可能性，并通过血清细胞因子的变化规律研究细胞因子在口服抗原耐受防治EAE的过程中所起的作用。实验分为以下两部分：一、口服抗原耐受预防和治疗大鼠EAE目的：观察口服抗原耐受对大鼠EAE的保护作用。方法：将65只健康6-8周龄Wistar大鼠随机分为6组：①正常对照组(CON，n=10)；②实验性变态反应性脑脊髓炎组(EAE，n=12)；③预防对照组(PREC，n=8)；④预防组(PRE，n=12)；⑤治疗对照组(TREC，n=12)：⑥治疗组(TRE，n=11)。预防组分别在抗原免疫前7、5、2天、免疫当天、免疫后2、5、7天以豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)5mg／1ml灌胃，预防对照组同期以磷酸盐缓冲液(PBS)1ml／只灌胃；治疗组在免疫后1周以GPSCH5mg／1ml×7d灌胃，治疗对照组同期以PBS1ml／只灌胃；CON组未作任何处理，其余各组均同曰按照EAE模型制作方法进行免疫，免疫后连续观察16天后处死。结果：1、体重增长：EAE组平均体重下降了(28.77±8.73)g，体重增长率为(—17.23+5.23)％，PREC组平均体重下降了(27.95±12.14)g，体重增长率为(—16.44±7.14)％，TREC组体重下降了(29.23±10.42)g，体重增长率为(—17.4±6.20)％，TRE组体重下降了(30.70±16.33)g，体重增长率(—18.95±10.08)％，各组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)，CON组体重增长(35.21±14.00)g，体重增长率(21.34±8.12)％，与CON组相比，前四组大鼠体重下降，差别有显著性意义(P＜0.05)；PRE组大鼠体重增长值为(7.26±10.75)g，体重增长率为(4.22±6.25)％，与PREC组和EAE组相比，预防组大鼠体重增长明显，差别有显著性意义(p＜0.05)。2、发病率：EAE组发病率为83.3％，PREC组发病率75％，TREC组发病率75％，TRE组发病率81.8％，各组之间相比，差别无显著性意义(p＞0.05)，PRE组大鼠发病率为33.3％，与PREC组和EAE组比较，差别有显著性意义(p＜0.05)。3、平均发病日期：EAE组平均发病日期为免疫后(8.66±0.97)天，PREC组(7.83±0.41)天，TREC组(8.44±1042)天，TRE(8.13±0.64)天，各组间之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)，PRE组平均发病日期为(9.67±1.53)天，与PREC组和EAE组比较，PRE组大鼠发病日期延迟，差别有显著性意义(p＜0.05)。4、最大神经功能评分：EAE组最大神经功能评分为(2.90±0.74)分，PREC组最大神经功能评分为(3.00±0.63)分，TREC组最大神经功能评分为(2.89±0.60)分，各组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)；PRE组最大神经功能评分为(2.33±0.58)分，与PREC组和EAE比较，PRE组大鼠最大神经功能评分减低，差别有显著性意义(p＜0.05)；TRE组最大神经功能评分为(1.75±0.71)分，与TREC组和EAE组比较，TRE组大鼠最大神经功能评分减低，差别有显著性意义(p＜0.05)。5、病理改变：EAE组、PREC组、TREC组大鼠脊髓实质有大量单个核细胞浸润，以淋巴细胞为主，浸润细胞在血管周围形成典型的袖套状改变；TRE组大鼠脊髓实质有大量单个核细胞浸润，以淋巴细胞为主，但未见典型的袖套状改变；PRE组大鼠脊髓实质有少量单个核细胞浸润，以淋巴细胞为主；而CON组脊髓组织未见炎性浸润及神经细胞的变性坏死。结论：口服抗原耐受对EAE大鼠有预防作用，并有一定的治疗作用。二、口服抗原耐受对EAE大鼠血清IFN-γ和IL-10浓度的影响目的：观察EAE大鼠血清细胞因子IFN-γ和IL-10浓度的动态变化，以及口服抗原耐受对这种浓度变化的影响，探讨细胞因子IFN-γ和IL-10在EAE大鼠的发病和口服抗原耐受防治EAE的过程中所起的作用。方法：将65只健康6-8周龄Wistar大鼠随机分为6组，分组方法同前。分别于免疫后第7、10、14天采外周血，进行细胞因子IFN-γ和IL-10浓度的检测。结果：在免疫后第7天，EAE组大鼠血清平均IL-10浓度为(95.19±24.59)ng／ml，PREC组(85.38±17.42)ng／ml，TRE组(87.09±19.92)ng／ml，TRE组(92.60±19.27)ng／ml，各组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)，CON组大鼠血清平均IL-10浓度为(125.16±25.50)ng／ml，与CON组相比，前四组大鼠血清IL-10浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)；PRE组大鼠血清平均IL-10浓度为(115.10±18.49)ng／ml，与PREC组和EAE组比较，PRE组大鼠血清IL-10浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；EAE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(122.65±7.86)ng／ml，PREC组(121.69±5.80)ng／ml，TREC组(116.29±8.00)ng／ml，TRE组(116.68±9.73)ng／ml，各组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)，CON组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(78.42±8.74)ng／ml，与CON组比较，前四组大鼠血清IFN-γ浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；PRE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(93.07±5.42)ng／ml，与PREC组和EAE组比较，PRE组血清IFN-γ浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)。在免疫后第10天，EAE组大鼠血清平均IL-10浓度为(73.32±24.50)ng／ml，PREC组(71.38±9.23)ng／ml，TREC组(71.08±16.45)ng／ml，各组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)，CON组大鼠血清平均IL.10浓度为(126.26±20.93)ng／ml，与CON组比较，前三组大鼠血清IL-10浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)；PRE组大鼠血清平均IL-10浓度为(101.69±17.11)ng／ml，与PREC组和EAE组比较，PRE组血清IL-10浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；TRE组大鼠血清平均IL-10浓度为(87.06±20.51)ng／ml，与TREC组和EAE组比较，TRE组血清IL-10浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；EAE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(141.48±10.12)ng／ml，PREC组(138.73±8.63)ng／ml，TREC组(143.65±10.98)ng／ml，各组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)，CON组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(77.76±7.10)ng／ml，与CON组比较，前三组大鼠血清IFN-γ浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；PRE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(104.39±10.40)ng／ml，与PREC组和EAE组比较，PRE组血清IFN-γ浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)；TRE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(119.79±13.28)ng／ml，与TREC组和EAE组比较，TRE组血清IFN-γ浓度降低，差别有显著性意义(P＜0.05)。在免疫后第14天，CON组大鼠血清平均IL-10浓度为(124.44±19.64)ng／ml，EAE组(83.33±15.72)ng／ml，PREC组(84.85±9.60)ng／ml，TREC组(82.17±14.69)ng／ml，与CON组比较，后三组大鼠血清IL-10浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)，三组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)；PRE组大鼠血清平均IL-10浓度为(113.28±20.88)ng／ml，与PREC组和EAE组比较，血清IL-10浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；TRE组大鼠血清平均IL-10浓度为(106.60±15.80)ng／ml，与TREC组和EAE组比较，血清IL-10浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)；CON组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(79.9±9.04)ng／ml，EAE组大鼠血清平均IFN-γ浓度分别为(124.03±10.60)ng／ml，PREC组(121.68±10.07)ng／ml，TREC组(118.78±11.83)ng／ml，与CON组比较，后三组血清IFN-γ浓度升高，差别有显著性意义(p＜0.05)，三组之间相比差别无显著性意义(p＞0.05)；PRE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(90.83±10.10)ng／ml，与PREC组和EAE组比较，PRE组血清IFN-γ浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)；TRE组大鼠血清平均IFN-γ浓度为(103.39±11.36)ng／ml，与TREC组和EAE组比较，TRE组大鼠血清IFN-γ浓度降低，差别有显著性意义(p＜0.05)。结论：在EAE大鼠中存在着血清细胞因子IL-10／IFN-γ之间的失衡，检测血清IL-10和IFN-γ细胞因子浓度对EAE的早期诊断以及病情判断有一定的参考价值；预防性和治疗性口服抗原耐受均可改善EAE大鼠血清细胞因子IL-10／IFN-γ之间的失衡，这可能是口服抗原耐受对EAE的保护机制之一。