【摘 要】
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背景:创面愈合作为机体应对损伤后的一种精细的自身修复过程,包括血栓形成,炎症发生,内皮血管生成,纤维组织重建等几个重要阶段。其中,表皮细胞的再上皮化是恢复皮肤完整性的重要过程,表皮细胞的方向性迁移是决定再上皮化完成时间的关键因素。创面形成后,由于皮肤完整性被破坏,跨上皮电势差的消失导致形成创缘指向创面中心大小为100mv/mm-300mv/mm的生理强度的直流电场。前期研究表明,生物强度电场可以促
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背景:创面愈合作为机体应对损伤后的一种精细的自身修复过程,包括血栓形成,炎症发生,内皮血管生成,纤维组织重建等几个重要阶段。其中,表皮细胞的再上皮化是恢复皮肤完整性的重要过程,表皮细胞的方向性迁移是决定再上皮化完成时间的关键因素。创面形成后,由于皮肤完整性被破坏,跨上皮电势差的消失导致形成创缘指向创面中心大小为100mv/mm-300mv/mm的生理强度的直流电场。前期研究表明,生物强度电场可以促进表皮细胞的方向性迁移,但其机制尚不清楚。细胞骨架的重要结构--微管(主要成分α-微管蛋白),不仅为细胞提供刚性支撑结构,也是多种驱动蛋白运输的交通轨道,在细胞发生定向迁移时,微管所主导的细胞骨架会形成前伸的头部和后缩的尾部,这种极性的改变是促使细胞迁移的强大动力,此外,微管乙酰化是微管的一种翻译后修饰形式,乙酰化后的微管具有更长寿更稳定的特性。HDAC6(组蛋白去乙酰化酶6)是调控微管乙酰化水平的酶,我们的科学假设是,HDAC6参与了生物强度电场对微管乙酰化水平的调控进而促使表皮细胞发生定向迁移运动。本实验通过建立稳定的外源性生物强度电场模型,检测了生物强度电场中表皮细胞内微管乙酰化水平的表达,探讨了生物强度电场通过HDAC6调控微管乙酰化及细胞方向性迁移的机制,明确了参与生物强度电场下细胞方向性迁移的因素,为开辟临床加速创面愈合的研究提供分子理论基础。目的:探究微管乙酰化在生物强度电场介导的表皮细胞方向性迁移中作用,明确生物强度电场促进表皮细胞定向迁移的分子机制。方法:实验选用人永生化表皮细胞Ha Cat细胞系作为体外实验的细胞模型。前期建立稳定的体外生物强度电场装置以模拟创面形成后生理强度的内源性电场。在200mv/mm的电场强度下,观察细胞的运动轨迹与速度。检测生物强度电场处理后细胞中乙酰化α-微管蛋白的变化以及HDAC6蛋白的表达情况。利用慢病毒转染高表达HDAC6,建立微管乙酰化低表达模型,生物电场中观测细胞的运动情况。生物强度电场中调控HDAC6蛋白表达,生物强度电场处理后检测乙酰化α-微管蛋白的表达,细胞运动的轨迹和速度。实验技术主要使用活细胞工作站观察细胞实时运动情况,使用蛋白免疫印迹和免疫荧光染色来检测乙酰化α-微管蛋白和HDAC6定量表达与分布定位。结果:生物强度电场促进表皮细胞发生方向性的迁移,乙酰化α-微管蛋白的水平在一定范围内随生物强度电场处理时间增加和强度增大而表达增加。微管乙酰化低表达模型中,生物强度电场对表皮细胞的方向性迁移未表现出促进作用。高表达HDAC6的表皮细胞在生物强度电场中处理后,乙酰化α-微管蛋白在电场中增高的幅度减小;反之,在低表达HDAC6的细胞中,乙酰化α-微管蛋白在电场中增高的幅度增大。结论:生物强度电场可能通过抑制HDAC6来增强乙酰化α-微管蛋白的表达进而促进表皮细胞的方向性迁移。
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