【摘 要】
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粪肠球菌又可称为粪链球菌（E.faecalis）,血清型为D型,分属于革兰氏阳性致病菌,其所导致的疾病占据人肠球菌属所导致机体侵染的80%-90%,可引发人体的许多疾病,不仅包括较常见的腹腔和盆腔感染、败血症、尿路感染等,还包括心内膜炎、脑膜炎以及牙齿根管感染等疾病,并且能在人和动物间水平传播,可感染多种动物疾病,如羔羊脑炎、仔猪关节炎、牛乳腺炎及子宫内膜炎等。粪肠球菌的致病性与其毒力因子的存在紧
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粪肠球菌又可称为粪链球菌（E.faecalis）,血清型为D型,分属于革兰氏阳性致病菌,其所导致的疾病占据人肠球菌属所导致机体侵染的80%-90%,可引发人体的许多疾病,不仅包括较常见的腹腔和盆腔感染、败血症、尿路感染等,还包括心内膜炎、脑膜炎以及牙齿根管感染等疾病,并且能在人和动物间水平传播,可感染多种动物疾病,如羔羊脑炎、仔猪关节炎、牛乳腺炎及子宫内膜炎等。粪肠球菌的致病性与其毒力因子的存在紧密相关,有学者指出,在gelE基因缺失状况下,其致病性会大幅度变低,且gelE基因还参与生物被膜的形成,并与炎症过程形成有关。试验所用特异性引物为根据GenBank上已登录的gelE基因序列（序列号:D85393.1）合成。本试验用PCR法对目的基因进行扩增,用扩增得到的gelE基因克隆到pMD19-T-Simple Vector后,将测序鉴定正确的目的基因通过BamHⅠ与XhoⅠ进行双酶切,经鉴定正确后的质粒亚克隆到pGEX-4T-1表达载体和pVAX1表达载体上,然后对pGEX-4T-gelE进行IPTG诱导,选出最佳的诱导时间并纯化,对其表达蛋白的生物学特征分析。其次选择Vero细胞对已构建好的pVAX1-gelE质粒进行转染,用间接免疫荧光法观察gelE基因是否表达。最后设置 GelE 免疫组、pVAX1-gelE免疫组、GelE+pVAX1-gelE 免疫组、pGEX-4T-1空载体对照组以及PBS对照组,将重组蛋白与重组质粒分别单独与联合注射对小鼠进行免疫接种,并于免疫后对小鼠断尾采血并采集血清,用ELISA检测法对小鼠血清内IgG、IgG1、IgG2a及IFN-γ、IL-4水平进行测定,以探讨接种后对机体所产生的特异性体液免疫和细胞免疫水平的效果。结果表示,经PCR及双酶切鉴定,扩增出大小为1 530 bp的粪肠球菌gelE基因,并成功构建pGEX-4T-gelE质粒和pVAX1-gelE质粒。通过IPTG进行诱导后得到约为81 ku与预期大小一致的表达蛋白,将纯化后的明胶酶蛋白通过Western-blot鉴定,有良好的反应原性。在倒置荧光显微镜下可以观测,pVAX1-gelE组的细胞表面有绿色荧光,而对照组则无荧光现象,表明pVAX1-gelE重组质粒可成功表达gelE蛋白。经三次免疫小鼠后,GelE组、pVAX1-gelE组和GelE+pVAX1-gelE组小鼠的体液免疫水平和细胞免疫水平全部显著高于pGEX-4T-1组及PBS组,且GelE+pVAX1-gelE组所诱发的体液免疫水平及细胞免疫水平均比GelE组和pVAX1-gelE组单独免疫时高,表明GelE+pVAX1-gelE这种联合免疫的方式能同时提高机体的体液免疫水平与细胞免疫应答水平。本试验对今后粪肠球菌疫苗的制备及免疫策略的研究奠基了基础。
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D7是一种化学制剂,为了研究水质改良剂D7在我国北方工厂化养殖中使用的可行性,本试验由三部分组成:试验一为D7对工厂化养殖用水中主要污染物氨氮和亚硝酸盐的去除效果以及对四种水产养殖常见致病菌的抑制效果;试验二以大菱鲆、凡纳滨对虾为研究对象,进行D7的急性毒性试验;试验三为模拟D7在凡纳滨对虾工厂化养殖过程中的应用效果的研究。试验一:使用天然海水模拟配制氨氮和亚硝酸盐浓度为5 mg/L的工厂化养殖用
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猪附红细胞体（Mycoplasma suis,M.suis）是一种无法体外培养的血营养型支原体。该病原体能引发猪慢性或急性传染性贫血,且感染病猪常伴随其他疾病的混合感染,这使得猪附红细胞体病的诊断更加困难。目前,猪附红细胞体病的防治主要依赖于化学药物的控制,但化学药物的滥用很容易诱发机体产生耐药性,因此疫苗的研制将成为防治猪附红细胞体病的最有效的措施之一。α-烯醇酶是一种已经报道过的M.suis膜
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猪附红细胞体（Mycoplasma suis）是能够引起猪贫血的一种病原体,在临床上可引起能明显威胁生命的溶血性贫血或轻度慢性贫血。猪附红细胞体病是一类全球性的疾病,对全世界的猪生产有着非常重要的经济影响,因此,必须建立有效的猪附红细胞体病的检测方法,通过检测猪血清中猪附红细胞体抗体的含量是判定猪附红细胞体感染的一种重要方法。本试验建立了基于猪附红细胞体水溶性膜蛋白的间接ELISA检测方法,并进行
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目的:探讨西地那非（Sildenafil）对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用及其机制,为今后临床治疗早产儿高氧肺损伤提供理论基础。方法:选择120只健康Wistar新生大鼠,随机分为对照组、高氧组（FiO2＞85%）和西地那非干预组（FiO2＞85%+西地那非）,每组40只依次进行编号,高氧组、西地那非干预组置于自制高氧实验舱内构造高氧肺损伤模型,对照组置于同室同压空气中。从造模第1 d开始,西地那非