论文部分内容阅读
目的:糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病主要的微血管并发症,DKD已成为世界范围内导致终末肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的第一大原因。本研究的主要目的是探究中西医结合治疗改善DKD微血管功能的作用、安全性及相关机制。方法:本研究分为四部分,第一部分为网络药理学研究:通过网络药理学的方法系统地探究肾康注射液治疗DKD的作用机制。通过TCMSP平台筛选肾康注射液主要活性成分及对应作用靶点;通过Genecards数据库筛选DKD的相关靶点,从而获得疾病-药物交集靶点。根据生物信息学的方法对肾康注射液治疗DKD的作用靶点进行基因本体功能(gene ontology,GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,用分子对接进行验证。第二部分为循证医学研究:在线检索主要中英文数据库,包括中国知网、万方数据库、维普数据库、中国生物医学文献数据库、the Cochrane Library、Pubmed、EMBase和Web of Science,筛选肾康注射液联合前列地尔与单独应用前列地尔治疗DKD的随机对照研究(Randomized controlled trial,RCT),纳入治疗前后血肌酐(Serum creatinine,Scr)、24小时尿蛋白定量(24 hour urine protein quantitative,24h UTP)等指标进行荟萃分析。第三部分为肾康注射液联合前列地尔治疗老年糖尿病肾病及非糖尿病肾脏疾病(non-diabeticrenal disease,NDRD)患者的临床疗效观察研究:将我院近10年住院治疗的老年CKD3-4期患者,分为DKD及NDRD两组,根据用药情况分为对照组、肾康注射液组、前列地尔组和肾康注射液联合前列地尔组,分析治疗前后患者肾功能及尿蛋白改善情况。第四部分为肾康注射液改善糖尿病肾病模型小鼠(db/db小鼠)微血管功能的初步研究:选用8周龄小鼠进行干预治疗,通过比较正常对照小鼠(m/m小鼠)、DKD模型小鼠(db/db小鼠)及模型+肾康治疗小鼠在治疗4周、8周及12周后Scr、尿蛋白变化及CD34在肾脏血管内皮细胞表达情况,探究肾康注射液对DKD微血管功能及肾功能的影响。结果:第一部分网络药理学:研究获得肾康注射液活性成分120个,对应作用靶点1948个,DKD相关靶点4444个,从而得到疾病-药物交集靶点183个,涉及肾康注射液治疗DKD相关的通路59条。通过分子对接结果得出:筛选的肾康注射液活性成分甲基黄连碱(Worenine)、氧化小檗碱(Berlambine)等与丝裂原活化蛋白激酶8(Mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)、JUN、APP等潜在靶点均有较好的结合能力。通过网络药理学研究方法发现肾康注射液的活性成分通过调节免疫炎性反应、能量代谢、自噬等相关通路,降低尿蛋白,改善肾功能,从而延缓DKD进展。第二部分荟萃分析:在降低24h UTP方面,观察组疗效优于对照组(MD:-0.22,95%IC[-0.44,-0.01])。在降低Scr、血尿素氮(Bloodurea nitrogen,BUN)方面,观察组疗效也更佳(Scr MD:-11.87,95%IC[-13.11,-10.63];BUN MD:-2.11,95%IC[-2.44,-1.78])。通过亚组分析发现,在大体上,治疗前Scr、BUN基础值越高,观察组较对照组降低Scr、BUN效果更显著。我们发现肾康注射液联合前列地尔治疗糖尿病肾病的疗效优于单用前列地尔,且肾功能较差时,效果更显著。第三部分临床研究:共纳入患者754例,其中对照组239例,肾康注射液组240例,前列地尔组142例,联合组133例。治疗前四组性别、年龄、血压、24h UTP、血白蛋白、肾小球滤过率、Scr及BUN等方面未见明显差异(P>0.05)。四组患者治疗时间为9.5天-12天。治疗后,对照组Scr较前未见明显降低(P>0.05),肾康注射液组、前列地尔组及联合组Scr较治疗前有所下降(P<0.05);在24h UTP方面,肾康注射液组、前列地尔组及联合组患者较治疗前有所下降(P<0.05);在血清白蛋白方面,四组较治疗前均未见明显差异(P>0.05)。通过亚组分析,我们发现肾康注射液组、前列地尔组及联合组对于NDRD的患者疗效均优于DKD的患者,能够有效提高NDRD患者的肾功能;对于DKD患者,虽然三个治疗组治疗前后肾功能改善未见显著统计学差异(P>0.05),但Scr均有一定程度降低,较对照组DKD患者有明显改善(P<0.05)。我们也发现CKD4期患者治疗前后肾功能改善情况优于CKD3期患者。在安全性方面,四组在治疗过程中均未出现不良反应。第四部分动物实验:在使用肾康注射液治疗12周后,模型+肾康治疗组小鼠尿蛋白、Scr较模型对照组明显下降。同时肾脏病理结果显示,肾康注射液可以在一定程度上增加肾脏局部血管内皮CD34蛋白表达,说明肾康注射液可能通过减轻肾脏微血管内皮损伤,从而改善肾脏局部微循环。结论:肾康注射液的主要活性成分Worenine、Berlambine等通过MAPK8、JUN、APP等靶点参与调节免疫炎性反应、能量代谢、自噬等通路,降低尿蛋白,改善肾功能,从而延缓DKD进展。肾康注射液联合前列地尔在治疗DKD方面优于单用前列地尔,且肾功能较差时,效果更显著。在治疗老年DKD及NDRD患者时,肾康注射液、前列地尔及联合治疗均能够降低尿蛋白,改善患者肾功能,疗效明显优于对照组(P<0.05),但NDRD患者较DKD患者效果更佳。动物实验的初步研究发现,肾康注射液可能是通过减轻肾脏微血管内皮损伤,改善肾脏局部微循环,延缓DKD进展。