乳腺癌是目前最常见的威胁女性生命的肿瘤疾病,癌症抗原15-3(CA15-3)是乳腺癌临床早期诊断,疗效评价的最重要标志物之一。目前CA15-3的检测方法具有诸多缺点,不利于普及。因此,建立针对CA15-3的简单、快速、廉价的检测方法具有重要的经济和社会价值。本课题将磁性纳米微球分离技术与胶体金免疫层析技术组合,开发了一种针对CA15-3的基于磁性微球的胶体金诊断试剂盒。首先采用反相悬浮聚合法制备壳聚糖/Fe304磁性纳米微球,对其进行工艺优化,并通过红外结构鉴定、磁饱和强度分析等表征,结果表明该复合微球平均粒径为633 nm,分散系数(PDI)为0.264。另外,通过柠檬酸三钠还原法,将胶体金直接偶联获得了金磁纳米颗粒。经激光粒度分析仪显示其平均粒径为896 nm,PDI为0.709,被金颗粒包裹后的磁饱和性能降低为包裹前的1/2,而元素分析图谱表明金颗粒的质量在整个金磁颗粒中占40.73%,同样表明,胶体金颗粒对磁性微球的磁性能影响不大。在此基础上,开展了基于磁性微球的胶体金诊断试剂盒的开发,包括工作液和试纸条两个部分。结果表明,金磁颗粒用于标记CA15-3单克隆抗体的最适pH=9.0,最小蛋白标记量为1.0 mg/ml,工作液中所用最适缓冲溶液体系为pH=9.0硼酸-硼砂缓冲溶液、最适表面活性剂及其浓度为8.0%的Tween-80。最后对所开发的基于磁性微球的胶体金诊断试剂盒与传统胶体金诊断试剂盒检测结果进行了对比。结果表明:前者的检测限(31.5 U/ml)相比后者(63 U/ml)降低为原来的50%,同时没有交叉性反应,从而说明相比传统胶体金诊断试剂盒,该技术具有更高的灵敏性,在临床检测领域等具有良好的应用前景。