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目的建立大鼠肾脏缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤模型;观察缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)、缺血后处理(ischemic postconditioning,IPo)、乌司他丁预先给药(ulinastatin,U)及乌司他丁预先给药联合缺血后处理(ulinastatin+ischemic postconditioning,U+IPo)对大鼠肾I/R损伤的影响,并探讨其机制。方法36只雄性SD大鼠随机分为6组(n=6),假手术组(S组),缺血再灌注组(I/R组),缺血预处理组(IP组),缺血后处理组(IPo组),乌司他丁组(U组)和乌司他丁联合缺血后处理组(U+IPo)。10﹪水合氯醛3 ml·kg-1腹腔注射麻醉,采用夹闭双侧肾蒂45 min、再灌注6 h制备肾脏I/R模型,用无损伤动脉夹夹闭双侧肾蒂,肾脏颜色变为暗红色即可确认肾脏血流阻断,造成双侧肾缺血45 min后,松开动脉夹,肾脏由暗红色恢复鲜红色即可确认血流恢复,夹闭和放开肾蒂时腹腔内各注射林格液20 ml·kg-1。S组仅行开腹,游离出双侧肾脏,分离双侧肾蒂不夹闭,伤口用生理盐水纱布覆盖,暴露45 min不作肾缺血处理; I/R组夹闭双侧肾蒂,缺血45 min后放开动脉夹;IP组在45 min持续缺血前先给予夹闭双侧肾蒂缺血5 min,再灌注5 min,反复3次,余操作同I/R组;IPo组在夹闭双侧肾蒂45 min后,再灌注10 s,缺血10 s,反复3次后,完全恢复肾脏血流;U组在缺血前30 min经尾静脉注射乌司他丁2×104 U·kg-1,余操作同I/R组; U+IPo组在缺血前30 min经尾静脉注射乌司他丁2×104 U·kg-1,余操作同IPo组。再灌注6 h时再次将大鼠麻醉,迅速开胸心脏取血处死动物。酶法测定血清肌酐(Cr)含量、苦味酸不除蛋白法测定尿素氮(BUN)含量和终点法测定尿酸(UA)的浓度;放射免疫分析法测定尿α1-微球蛋白(α1-MG)和β2-微球蛋白(β2-MG)的含量;硫代巴比妥酸(TBA)法测定肾组织中丙二醛(MDA)含量和黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肾组织Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达,表达水平以与其相应的内参β-actin的光密度比表示;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测肾组织中凋亡细胞,计算肾小管上皮细胞凋亡指数(apopatic index,AI);采用免疫组化(SP)法观察肾组织中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,计算蛋白阳性染色指数(Positive index , PI);苏木素-伊红(HE)染色,在光镜下观察肾组织病理学变化。结果与S组比较,再灌注6 h时,I/R组、IP组、IPo组、U组和U+IPo组Cr和BUN浓度明显升高(P<0.05),UA浓度差异无统计学意义(P>0.05),α1-MG和β2-MG含量增加(P<0.05),肾组织SOD活性降低(P<0.05),MDA含量增加(P<0.05),Bcl-2、Bcl-2 mRNA表达量降低(P<0.05),Bax、Bax mRNA表达量升高(P<0.05),Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值降低(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡指数(AI)增加(P<0.05),病理学损伤明显。与I/R组相比,IP组、IPo组、U组和U+IPo组均减轻了缺血再灌注引起的上述指标的改变,Cr和BUN浓度明显降低(P<0.05),UA浓度差异无统计学意义(P>0.05),α1-MG和β2-MG含量减少(P<0.05),肾组织SOD活性升高(P<0.05),MDA含量减少(P<0.05),Bcl-2、Bcl-2 mRNA表达量升高(P<0.05),Bax、Bax mRNA表达量降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值升高(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡指数(AI)减少(P<0.05),光镜下可见肾组织损伤程度明显减轻。与IP组比较, U+IPo组Cr浓度降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达量升高( P<0.05 ) ; U组和U+IPo组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值升高(P<0.05)。与IPo组比较,U+IPo组Bcl-2 mRNA表达量升高(P<0.05),U组和U+IPo组Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的比值升高(P<0.05)。与U组比较,U+IPo组Cr浓度降低(P<0.05),MDA含量减少(P<0.05)。IP组、IPo组、U组和U+IPo组其余指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1缺血预处理、缺血后处理,乌司他丁预先给药及乌司他丁联合缺血后处理均可减轻大鼠肾I/R损伤,改善肾功能。其主要机制可能与直接清除自由基,增强SOD活性,减轻脂质过氧化反应,通过上调Bcl-2 mRNA、增加Bcl-2蛋白的表达和下调Bax mRNA,降低Bax蛋白的表达,从而使Bcl-2/Bax比值升高而抑制IRI后的肾小管上皮细胞凋亡有关。2缺血后处理、乌司他丁联合缺血后处理同缺血预处理与乌司他丁对肾缺血再灌注损伤有相似的保护效果。乌司他丁联合缺血后处理的保护作用更好。