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本研究应用高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化家兔模型,以硝苯地平为对照,通过检测家兔血液流变学主要指标、腹主动脉血小板源生长因子B链和平滑肌α-肌动蛋白的表达,旨在探讨益气活血方芪丹煎防治动脉粥样硬化的机制,为进一步扩大益气活血方芪丹煎的临床应用提供理论依据。
研究方法:
1.动物分组及处理:将24只4月龄健康雄性新西兰白兔,(体重2.4~2.9kg),随机均分为四组,即正常对照组、模型组、芪丹煎实验组和硝苯地平对照组。模型组每天喂饲高脂颗粒饲料;芪丹煎实验组每兔每天喂饲按100g饲料含生药60g的量制成的高脂颗粒饲料;硝苯地平对照组每天喂饲按每兔每日40mg硝苯地平的量制成的高脂颗粒饲料;正常对照组每天喂饲普通颗粒饲料。每组每天进食总量相等,限制为100g,动物分笼饲养,自由饮水,实验全程12周。12周后,各组家兔耳缘静脉采血,用于检测血小板粘附性和聚集性、血液流变学主要指标;麻醉后开胸取活体胸主动脉组织(大小约1×1×0.5mm),于4%戊二醛固定,用于透射电镜检查超微结构的变化;放血处死家兔,取腹主动脉置于10%中性甲醛固定液,用于HE染色和血小板源生长因子B链、平滑肌α-肌动蛋白的免疫组化检测。
2.观察指标:(1)血小板粘附性和聚集性的测定;(2)血液流变学主要指标的测定;(3)HE染色病理观察;(4)透射电镜主动脉观察;(5)血小板源生长因子B链和平滑肌α-肌动蛋白免疫组化图象分析。
研究结果:
1.成功建立动脉粥样硬化模型。
2.HE染色病理观察:正常对照组可见主动脉内膜表面光滑,中层平滑肌细胞数量不多。模型组可见主动脉内膜明显增厚,管腔内有动脉粥样斑块形成,中层平滑肌细胞数量明显增多。芪丹煎实验组内膜增厚不明显,管腔内有少量动脉粥样斑块形成,中层平滑肌细胞数量无明显增多。硝苯地平对照组可见内膜增厚不明显,管腔内有动脉粥样斑块形成,中层平滑肌细胞数量增多。
3.透射电镜主动脉观察:正常对照组家兔主动脉超微结构正常。模型组家兔主动脉内膜破坏,结构紊乱,内膜和中膜之间有大量泡沫细胞,中膜结缔组织大量增生,平滑肌细胞增生且穿过内膜组织向管腔内生长。芪丹煎实验组主动脉超微结构的病理变化明显减轻,内膜基本平整,内膜和中膜之间有结缔组织增生,未见泡沫细胞,中膜结缔组织增生不显著。硝苯地平对照组主动脉超微结构有轻度异常。
4.血小板粘附性和聚集性的变化:与正常对照组比较,模型组、芪丹煎实验组、硝苯地平对照组血小板粘附率和聚集率均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,芪丹煎实验组、硝苯地平对照组血小板粘附率和聚集率明显减少(P<0.01)。与硝苯地平对照组比较,芪丹煎实验组血小板聚集率明显降低(P<0.05),血小板粘附率有降低趋势,但无统计学意义。
5.血液流变学主要指标的变化:与正常对照组比较,模型组全血黏度(包括低切、高切)、血浆黏度及红细胞压积均明显升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,芪丹煎实验组、硝苯地平对照组全血黏度(包括低切、高切)、血浆黏度及红细胞压积均明显降低(P<0.01,P<0.05)。
6.各组家兔腹主动脉血小板源生长因子B链表达的变化:与正常对照组比较,模型组、芪丹煎实验组、硝苯地平对照组腹主动脉的血小板源生长因子B链表达量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,芪丹煎实验组、硝苯地平对照组的血小板源生长因子B链表达量明显降低(P<0.01)。与硝苯地平对照组比较,芪丹煎实验组的血小板源生长因子B链表达量明显降低(P<0.01)。
7.各组家兔腹主动脉平滑肌α-肌动蛋白表达的变化:与正常对照组比较,模型组、芪丹煎实验组、硝苯地平对照组α-肌动蛋白的表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,芪丹煎实验组、硝苯地平对照组α-肌动蛋白的表达显著增强(P<0.01)。与硝苯地平对照组比较,芪丹煎实验组的α-肌动蛋白表达量明显增强(P<0.01)。
研究结论:本研究结果显示,益气活血方芪丹煎对动脉粥样硬化有良好的防治作用,推测其作用机制包括以下几个方面:(1)抑制血小板粘附聚集,降低血液粘稠度,改善血液流变性;(2)抑制主动脉血小板源性生长因子B链的表达,上调主动脉平滑肌α-肌动蛋白的表达,抑制血管平滑肌细胞表型转化及增殖。