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拟南芥(Arabidopsis thaliana)热激因子HsfAla是与耐逆境有关的重要转录调控因子,研究表明HsfAla不但具有耐高温功能,而且具有耐酸、碱及H202的功能,然而对于HsfAla耐逆境的机理,目前还有很多不清楚的地方。本论文以HsfAla过量表达的转基因拟南芥植株(OE)为试验材料,一方面采用半定量RT-PCR方法检测逆境条件下OE植株的HsfAla靶基因-热激蛋白Hsp70和Hsp18.2的nRNA表达特征,另一方面通过Western分析检测热激蛋白Hsp70在蛋白水平的表达特征,旨在研究在植株水平上HsfAla能否被热、酸、碱及H202逆境激活,并对调控热激蛋白的诱导性表达具有重要作用。本研究的主要结果如下:(1)从分别经过热、酸、碱及H202长时间逆境处理的拟南芥小苗中提取总RNA,用半定量RT-PCR方法检测OE植株的Hsp70和Hspl8.2在mRNA水平的相对表达量。发现:与未经逆境处理的对照相比,上述逆境的长时间处理(20min以上)使拟南芥OE植株与野生型植株(WT)的Hsp70和Hsp18.2在mRNA上的表达量提高,但OE植株与WT植株的表达量水平没有明显差异。(2)将拟南芥小苗在热、酸、碱及H202条件下分别处理较短时间(1min,5min);提取总RNA,检测拟南芥OE植株的Hsp70和Hsp18.2在mRNA水平的相对表达量。发现:与未经逆境处理的对照相比,1mmin逆境处理时,Hsp70和Hsp18.2的mRNA表达量增高,而且转基因植株明显高于野生型植株,5min时两种植株的表达量趋于相等。(3)从拟南芥中提取总蛋白,用Western分析方法检测拟南芥热激蛋白Hsp70的表达情况。发现在逆境处理1min时,有少量的Hsp70的诱导表达,随着逆境时间增加到5min和10min, Hsp70的量也在增加,而且转基因植株的表达量多于野生型植株的表达量,当处理20mmin时,转基因植株和野生型植株的热激蛋白Hsp70的表达量继续增加且趋于一致。(4)以上结果显示:HsfAla的转录活性能被热、酸、碱及H2O2激活,并在逆境的初期阶段对调控热激蛋白的诱导性表达具有重要作用。但在逆境后期阶段,HsfAla过量表达与野生型植株之间没有差异,可能此时其它因子对热激蛋白的表达进行了调控。这些研究结果为理解HsfAla耐逆境机理提供了理论依据。