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禽波氏杆菌病是由禽波氏杆菌(Bordetella avium)引起家禽的一种高度接触性传染病。我国最早是由朱瑞良等在1990年初发现的,该病主要引起鸡胚死亡、孵化率降低和雏鸡急性死亡及成年鸡的眼炎等。据报道该病在不同地区的感染率为10%～50%,患病鸡群生长迟缓,饲料报酬低,给养鸡业造成了较大的经济损失。近年来,细菌细胞膜中的一种重要组成成分外膜蛋白(outer-membrane-protein,OMP)的免疫作用越来越受到科技人员的关注,并进行了研究。实验证明,OMP具有良好的免疫原性,不仅可刺激体液免疫,而且也可刺激细胞免疫作用。尽管我们课题组曾经研究过禽波氏杆菌全菌苗的免疫效果,但由于全菌中与免疫无关的成分太多,可能影响主要免疫物质的免疫作用,所以我们进行了禽波氏杆菌OMP的提取工艺及其免疫原性的研究,这为进一步开发禽波氏杆菌OMP亚单位疫苗奠定了基础。现将研究情况报告如下:试验一:间接ELISA检测禽波氏杆菌抗体方法的建立及临床应用首次建立了用禽波氏杆菌外膜蛋白作为包被抗原,检测禽波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。试验的最佳反应条件为:抗原的稀释度为1:160(此时蛋白浓度为15μg/mL);血清稀释度为1:200;酶标二抗稀释度为1:4000;用磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH7.4)作包被液;选择含1%BSA的PBST作封闭液和稀释液;4℃、24h包被;37℃、3h封闭;血清反应时间为60min;酶标抗体反应时间为45min;底物反应时间为20min。应用该方法检测禽波氏杆菌阳性血清,其灵敏度为平板凝集试验的200-400倍;应用该方法临床上进行血清学调查,其灵敏度为平板凝集试验的3-4倍,而且还具有良好的稳定性和可重复性,较高的特异性和敏感性,操作简便,快速等特点。试验二:禽波氏杆菌外膜蛋白提取及免疫原性的检测为研究禽波氏杆菌OMP的免疫原性,本试验采用超声波破碎、十二烷酰肌氨酸处理技术提取了禽波氏杆菌OMP,采用Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量,进行了SDS-PAGE电泳检测,然后制备油乳剂OMP免疫抗原,对1日龄雏鸡分别以0.3mL(OMP90μg)、0.5mL(OMP150μg)、0.8mL(OMP240μg)的剂量颈部皮下接种。结果:禽波氏杆菌OMP含量为300μg/mL;禽波氏杆菌OMP最佳免疫剂量为0.5mL/只;通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试,抗体效价在1:28以上能抵抗致死量禽波氏杆菌的攻击。据间接ELISA法检测的抗体水平可知,抗体的持续时间足以保护雏鸡避过易感日龄,试验发现OMP具有良好的免疫原性。本试验结果将为禽波氏杆菌OMP单克隆抗体的制备、快速诊断试剂盒的研制、亚单位疫苗的开发奠定良好的基础。