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目的及背景三阴性乳腺癌(TNBC)是一组异质性疾病,不同亚型之间预后差别很大。目前针对TNBC尚无公认的临床预后标记物。生长停滞特异性蛋白6(Growth-arrest specific protein 6,Gas6)作为一种具有促有丝分裂活性的蛋白质,能够促进肿瘤的侵袭和转移,已证明与多种癌症的预后密切相关。体外研究中,Gas6蛋白的主要来源为肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)。Gas6蛋白与TNBC的预后是否相关,尚缺乏相关的临床研究。本实验目的为,研究Gas6蛋白在TNBC的预后价值以及与TAMs的浸润之间相关性,并进一步探究其相关的机制。方法应用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测278例TNBC患者原发灶Gas6蛋白的表达及间质TAMs的浸润,分析Gas6蛋白的表达与TNBC患者临床病理特征、生存以及TAMs之间的相关性。利用Transwell共培养体系将巨噬细胞分别与上皮样TNBC细胞系MDA-MB-468及间质样TNBC细胞系MDA-MB-231共培养,应用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)及酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组巨噬细胞共培养前后Gas6表达的差异。提取上皮样TNBC细胞与巨噬细胞共培养体系中培养基上清(上清液A)以及间质样TNBC细胞与巨噬细胞共培养体系培养基上清(上清液B),分离部分上清液B加入Gas6蛋白的中和性抗体,将上清液A、B与添加中和性抗体的上清液B分别加入上皮样TNBC细胞系MDA-MB-468培养基中,利用Western Blot检测三组MDA-MB-468细胞上皮间质转化(epidermal mesenchymal transition,EMT)标记物波形蛋白及E钙黏蛋白的表达情况。结果Gas6蛋白的表达TNBC患者淋巴结转移(P=0.001)及TAMs浸润(P<0.001)显著相关,与患者年龄(P=0.734)、肿瘤大小(P=0.186)、TNM分期(P=0.185)、组织学分级(P=0.110)、P53(P=0.100)及人类表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)(P=0.624)之间无显著相关性。Gas6蛋白表达阴性TNBC患者的总生存(overall survival,OS)明显优于阳性患者(P=0.002)。Cox回归多因素分析显示,Gas6蛋白表达(危险比(Hazard ratio,HR):0.654,95%可信区间(confidence interval,CI):0.432-0.990,P=0.045)、TNM分期(HR:0.523,95%CI:0.339-0.807,P=0.003)及表皮生长因子EGFR(HR:0.619,95%CI:0.339-0.960,P=0.032)为TNBC独立的预后因素。预后评分0-1分组患者总生存明显优于2分组患者(P=0.001)。RT-qPCR及ELISA检测发现,巨噬细胞与间质样TNBC细胞系MDA-MB-231共培养后Gas6表达上调,而与上皮样TNBC细胞系MDA-MB-468共培养后Gas6表达无显著差异。Western Blot检测结果显示,培养体系中加入上清液B,能够促进MDA-MB-468间质细胞标志物波形蛋白表达上调、上皮细胞标记物E-钙黏蛋白表达下调,培养体系中加入Gas6蛋白的中和性抗体后能够逆转该现象。加入上清液A的MDA-MB-468波形蛋白与E-钙黏蛋白表达无显著差异。结论间质样TNBC细胞能够诱导巨噬细胞Gas6表达上调,Gas6蛋白为TNBC患者不良预后因素,能够促进上皮样TNBC细胞向间质样TNBC发生转变,联合Gas6蛋白与TAMs可作为TNBC患者重要的预后生物标记物。