背景/目的:随着现代人饮食结构的改变,工作节奏的增快,精神和社会压力的增大,便秘已成为困扰人们生活的重要因素之一,大幅度降低了人们的生活质量。便秘不仅会造成肠道蠕动功能下降引起排泄困难等常见症状,同时还会伴随肠道菌群紊乱,长期便秘甚至会成为各种疾病的诱发因素。现有治疗手段除了改善饮食结构、增加喝水量、运动量等基础治疗外,临床常以泻剂、促胃动力药为主要治疗手段,然而大部分便秘治疗药物在改善便秘症状的同时存在各种各样的潜在副作用,因此寻求一种温和安全且有效的干预治疗手段是非常必要的。大量文献研究通过动物便秘模型实验、临床人体干预实验发现单菌株益生菌制剂能够改善便秘症状,增快肠道内容物的推进,调节肠道菌群结构,促进粪便排出体外。但对于多菌种联合制剂是否能够改善便秘症状,调节肠道菌群结构尚不明确。因此本研究目的就是建立复方地芬诺酯诱导的小鼠便秘模型,使用不同剂量嗜酸乳杆菌NCFM-乳双歧杆菌Bi-07-鼠李糖乳杆菌NH001三联益生菌制剂对便秘小鼠进行干预,探索新型三联益生菌对便秘的改善作用,同时使用已发展成熟的DNA基因测序16s r DNA法代替传统的培养皿细菌培养计数法,直观并全面的探索使用新型三联益生菌制剂能否改善小鼠肠道菌群结构。研究方法:小肠推进率实验及排便颗粒数实验分别使用50只KM小鼠适应性饲养5天后随机分为空白对照组、模型对照组和低中高三个剂量组,每组各10只。空白对照组和模型对照组给予蒸馏水,低中高剂量组每天分别给予0.165g/kg·bw、0.33g/kg·bw、0.99g/kg·bw三联益生菌制剂,灌胃14天后禁食24小时,模型对照组及各剂量组小鼠以50mg/kg·bw口服复方地芬诺酯混悬液(即0.1ml/10g·bw)建立小鼠便秘模型,空白对照组以相同灌胃量给予蒸馏水,分别于45分钟后和5小时后观察各组小鼠小肠墨汁推进率,计算各组小鼠排便颗粒数及粪便含水量并记录各组小鼠首次排黑便时间。肠道菌群调节作用实验将42只BALB/c小鼠中随机抽取10只作为自身对比空白组,适应性饲养5天后将所有小鼠随机分为空白对照组和低中高三个剂量组,空白对照组给予蒸馏水,各剂量组以相同剂量给予三联益生菌制剂灌胃。自身对比空白组于灌胃前无菌采集小鼠直肠粪便,所有小鼠灌胃30天后无菌采集直肠粪便,使用16s r DNA基因测序对粪便中菌群DNA进行多样性及各水平菌群物种测定。研究结果:1)小肠推进率实验、排便颗粒数实验、肠道菌群调节作用实验中,各组小鼠经蒸馏水、低中高三种剂量组灌胃14天、30天均未对其体重产生任何影响,毛色正常,精神状态良好。表明该新型三联益生菌不同剂量的短期及长期使用对小鼠体重增长无作用,同时对小鼠生长无不良反应。2)小肠推进率实验中,模型对照组小肠推进率较空白对照组显著降低(P<0.05),提示造模成功。经统计分析,低、中、高剂量组小鼠的墨汁推进率数值均高于模型对照组,其中高剂量组小鼠小肠墨汁推进率显著高于模型对照组(P<0.05)。3)排便颗粒数实验中,模型对照组首次排黑便时间及5小时排便颗粒数较空白对照组显著降低(P<0.05),提示造模成功。经统计分析,低、中、高剂量组小鼠的首次排黑便时间及5小时排便颗粒数较模型对照组均有显著差异(P<0.05),其中中剂量组小鼠两指标与模型对照组有极显著差异(P<0.01)。各组小鼠在粪便含水量指标上无差异。4)肠道菌群调节作用实验中,空白对照组较自身对照空白组的Chao1指数、Observed Species指数、Whole Tree指数、Shannon指数和Simpson指数等用来估算微生物群落的多样性指标值显著增高(P<0.05),说明进食有助于小鼠肠道菌群多样性的形成,同时各剂量组多样性指标相较空白对照组也明显增高,说明给予三联益生菌制剂相较单独给予蒸馏水更有助于小鼠肠道菌群多样性的形成。同时,各剂量组小鼠粪便中双歧杆菌属、乳杆菌属等益生菌数量较灌胃前显著增加(P<0.05),大肠杆菌属、梭菌属、肠球菌属等有害菌属显著降低(P<0.05)。研究结论:新型嗜酸乳杆菌NCFM-乳双歧杆菌Bi-07-鼠李糖乳杆菌NH001三联益生菌能够不同程度改善便秘症状,同时对于肠道菌群结构具有一定调节作用。