论文部分内容阅读
目的:通过评价实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠嗅觉的变化,嗅球（Olfactory bulb,OB）病灶情况,检测小鼠血清维生素D水平,OB维生素D受体（Vitamin D receptor,VDR）蛋白的分布,OB中嗅觉标记蛋白（Olfactory marker protein,OMP）及VDR的变化。初探维生素D对EAE小鼠嗅觉功能的影响及其可能机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为Normal组（Normal）、EAE组（EAE）、EAE补充维生素D组（EAE+VD）。采用髓鞘少突细胞糖蛋白（Myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）35-55多肽/完全弗氏佐剂（Freund complete adjuvant,CFA）免疫C57BL/6小鼠,建造EAE模型;EAE+VD组于免疫第1天起隔天饲喂维生素D3;Normal组用等量生理盐水饲喂小鼠。整个实验周期中采用Weaver’s15分法对小鼠神经功能进行评分;埋藏食物实验观察小鼠嗅觉行为学变化;小动物核磁共振成像技术扫描活体小鼠OB病灶情况;苏木精-伊红染色（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察脊髓及OB组织的炎症细胞浸润;固蓝染色（Luxol Fast Blue,LFB）观察脊髓髓鞘脱失;双重染色法免疫荧光组织化学染色检测OB中VDR及OMP蛋白表达情况;免疫印迹（Western blot,WB）及实时荧光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）检测OB中VDR及OMP的m RNA表达情况。结果:成功建造EAE模型,神经功能评分升高;相对EAE组,EAE+VD组神经功能评分更低（即:临床症状更轻）;补充维生素D3后,EAE+VD组比EAE组血清维生素D3水平升高明显,差异有统计学意义（P=0.0108,P＜0.05）;埋藏食物实验中,第一第二天EAE组较Normal组潜伏期（即:找到食物小球所需时间）延长,第三天EAE组较Normal组潜伏期延长更为明显,差异有统计学意义（P=0.0238,P＜0.05）;EAE+VD组潜伏期较EAE组缩短,差异有统计学意义（P=0.0333,P＜0.05）;小动物核磁共振成像技术扫描中,T1WI像EAE小鼠OB出现斑片状低信号病灶,T2WI像EAE小鼠OB中出现明显斑片状高信号病灶,Normal组及EAE+VD组未出现明显病灶;脊髓病理染色中:EAE组见多处神经元变性坏死,炎性细胞浸润增多,脱髓鞘较重,EAE+VD组较EAE组神经元变性坏死减少,炎性细胞浸润变少,脱髓鞘减轻;OB病理染色中:EAE组见多处神经元变性坏死,EAE+VD组神经元变性坏死较EAE组轻;OB免疫荧光双染检测VDR及OMP蛋白未见共表达,可见VDR分布于嗅神经层,且EAE组VDR阳性细胞相对于Normal组减少,EAE+VD组VDR表达阳性细胞数较EAE组增多;OB中EAE组与Normal组相比VDR蛋白表达下降,差异有统计学意义（P=0.0120,P＜0.05）,EAE+VD组与Normal组相比VDR蛋白表达有下降趋势,但较EAE组有上升趋势;EAE组与Normal组相比VDR m RNA表达下调,差异有统计学意义（P=0.0189,P＜0.05）,EAE组与EAE+VD组相比VDR m RNA表达下调,差异有统计学意义（P=0.0260,P＜0.05）;OB中EAE组及EAE+VD组OMP蛋白表达较Normal组有下调趋势,且EAE组较EAE+VD组下调明显;EAE组较Normal组OMP m RNA表达下调,差异有统计学意义（P=0.0017,P＜0.01）,EAE+VD组较Normal组OMP m RNA表达下调,差异有统计学意义（P=0.0205,P＜0.05）,EAE组与EAE+VD组相比较,OMP m RNA表达有下调趋势。结论:EAE小鼠行为学上存在嗅觉功能受损,并可检测出客观存在的OB病灶;维生素D干预EAE改善EAE小鼠临床症状,并减少客观病灶中炎性浸润及髓鞘脱失;OB中VDR表达在EAE组较EAE+VD下调、OB中OMP表达在EAE组较EAE+VD组下调、维生素D对EAE小鼠嗅觉功能的保护作用可能与OB中VDR及OMP表达相关。