【摘 要】
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目的:成人急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）治疗复发率高,耐药是治疗中亟待解决的问题。目前已有研究发现核转录因子红系2相关因子2（Nrf2）影响肿瘤细胞的增殖、生长和凋亡。但Nrf2在成人B-ALL中发挥的作用和机制仍不清楚。本研究旨在探索Nrf2在成人B-ALL中的表达情况及其影响B-ALL化疗耐药的分子机制。方法:采用Real time-PCR、Western blot、免疫荧光检测Nrf2在
【基金项目】
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国家自然科学基金（81960032）,题目:Nrf2通过调控DNA错配修复通路影响急性髓系白血病耐药的机制研究；
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目的:成人急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）治疗复发率高,耐药是治疗中亟待解决的问题。目前已有研究发现核转录因子红系2相关因子2（Nrf2）影响肿瘤细胞的增殖、生长和凋亡。但Nrf2在成人B-ALL中发挥的作用和机制仍不清楚。本研究旨在探索Nrf2在成人B-ALL中的表达情况及其影响B-ALL化疗耐药的分子机制。方法:采用Real time-PCR、Western blot、免疫荧光检测Nrf2在健康供者、初诊和复发/难治B-ALL患者中的表达情况。在功能学研究中,构建Nrf2过表达和下调的慢病毒,转染到Nalm-6,RS4:11细胞株中检测转染效率后筛选稳定株保存待用。运用流式细胞术（FCM）和CCK-8来检测Nalm-6,RS4:11,Sup-b15三种BALL细胞在长春新碱（VCR）,柔红霉素（DNR）,VCR+Brusatol（一种Nrf2抑制剂）,DNR+Brusatol四组不同药物处理后的凋亡率。慢病毒转染后,Nrf2过表达和下调的两个细胞株在相同条件下用同种药物刺激凋亡,FCM和CCK-8检测凋亡率,通过比较来验证Nrf2能影响B-ALL化疗敏感性。在分子通路实验中,使用Western blot检测过表达Nrf2后PI3K,AKT及该信号通路下游凋亡相关蛋白的表达情况,继而使用抑制剂MK-2206抑制AKT后再次检测这些蛋白的表达改变。最后,用免疫缺陷鼠建立皮下异种移植模型来研究Nrf2高表达对肿瘤体内生长情况和药物治疗的影响。结果:B-ALL患者组与健康供者组相比Nrf2表达明显增高而且复发/难治组比初诊组Nrf2表达更高。Nalm-6,RS4:11,Sup-b15三个B-ALL细胞系中都显示VCR和Brusatol之间有协同作用关系（结合指数CI＜1）。在同样条件给予相同浓度的VCR,过表达Nrf2组比对照组（EV1）B-ALL细胞凋亡率低,下调Nrf2组比对照组（EV2）B-ALL细胞凋亡率高。AKT的激活能上调Nrf2的表达,Nrf2高表达可以抑制促凋亡蛋白BAD的表达从而解除BAD对抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制作用,B-ALL细胞抗凋亡能力增加。Nrf2对BAD的作用在抑制上游AKT后仍旧存在。在体内实验中,Nrf2高表达能促进肿瘤增殖生长并且同样用VCR治疗时,高表达Nrf2组比EV1组肿瘤增殖更快。结论:Nrf2的异常高表达主要降低B-ALL细胞对VCR化疗的敏感性并且能抵抗凋亡促进细胞增殖。VCR的使用可以激活PI3K-AKT信号通路。抑制AKT时可以抑制Nrf2的表达。而Nrf2的高表达主要抑制该信号通路的凋亡蛋白BAD的表达并且这种抑制效果在抑制AKT后仍旧存在。Nrf2通过影响凋亡蛋白BAD与抗凋亡蛋白Bcl-2之间的平衡调控B-ALL细胞的凋亡进程。
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