【摘 要】
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奶牛乳房炎是目前对全球奶牛养殖业造成危害最大的传染病之一,其病因多且复杂,病原菌是引起奶牛乳房炎最常见和主要的原因。在对乳房炎进行诊断时,虽然通过细菌的形态学特征及生化特征能进行准确的诊断,但因鉴定过程耗时长、步骤较繁琐等原因,难以满足临床快速检测需要。本文从临床型奶牛乳房炎奶样中分离出一株乳源链球菌,并进行了细菌形态学鉴定、生化鉴定、细菌16S r RNA基因鉴定;通过筛查主要毒力基因分析其致病
【基金项目】
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国家自然基金项目（31660724）；
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奶牛乳房炎是目前对全球奶牛养殖业造成危害最大的传染病之一,其病因多且复杂,病原菌是引起奶牛乳房炎最常见和主要的原因。在对乳房炎进行诊断时,虽然通过细菌的形态学特征及生化特征能进行准确的诊断,但因鉴定过程耗时长、步骤较繁琐等原因,难以满足临床快速检测需要。本文从临床型奶牛乳房炎奶样中分离出一株乳源链球菌,并进行了细菌形态学鉴定、生化鉴定、细菌16S r RNA基因鉴定;通过筛查主要毒力基因分析其致病性特点;检测其对15种抗生素的耐药性;建立了无乳链球菌PCR检测方法并对其敏感性、特异性以及临床使用性进行了初步验证。结果表明:（1）从临床型奶牛乳房炎奶样中分离的菌株为球形呈链状排列、革兰氏染色阳性,在THB培养基形成灰白色,表面光滑隆起的针尖状小菌落;绵羊脱纤血琼脂平板上形成β溶血现象;触酶试验为阴性,分解赖氨酸、乳糖、水杨苷,不分解七叶苷、甘露醇、山梨醇,VP试验阳性,符合无乳链球菌的形态学和生化特性;分离株16S r RNA基因片段的测序结果与无乳链球菌同源性为99.76%,鉴定该分离株为无乳链球菌;分离株含有sip、hyl B、cps E、rib、bib A五个主要毒力基因;药敏试验结果表明,该分离株对克林霉素、阿奇霉素、环丙沙星、庆大霉素、氧氟沙星、头孢唑啉、万古霉素、恩诺沙星、青霉素、阿莫西林、头孢曲松均高度敏感,对多粘菌素B耐药。（2）本文建立的无乳链球菌PCR检测方法能检出的DNA的最低浓度为1×10~3copies/μL;特异性较好,能鉴别大肠杆菌、停乳链球菌等奶牛乳房炎常见病原菌;扩增产物约为401 bp,其大小与预计大小相符,测序结果显示其核酸序列与已发表无乳链球菌同源性为98.20%,确定本文建立的方法能准确的检测出无乳链球菌;运用本文建立的PCR检测方法对临床样品检测结果显示,92份正常奶样中检出6份阳性样品,检出率为7%,78份临床型乳房炎奶样中检出9份阳性样品,检出率为12%。本文研究结果为无乳链球菌的深入研究提供了物质基础,为无乳链球菌性奶牛乳房炎的诊断提供了可靠的方法。
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