癌症的形成和发展是一个非常复杂的生理和生化过程。对于癌症患者由于肿瘤细胞利用免疫检查点避免免疫系统的监视,因此免疫系统不再能够识别异常的肿瘤细胞。针对肿瘤细胞逃脱免疫监视的特性开发出许多特异性良好的单克隆抗体药物,在使用过程中也取得了不错的效果。PD-L1与PD-1是质膜上的蛋白质。PD-1,也被称为CD279,是I类跨膜受体,PD-1主要表达在T细胞、B细胞、单核细胞、天然性杀伤T细胞和树突状细胞表面。对于PD-1来说,目前发现它的两种配体:PD-L1和PD-L2。PD-L1在造血细胞和非造血细胞上都存在表达。研究发现多种肿瘤细胞在其细胞表面都发现了 PD-L1表达,例如黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、恶性胶质瘤、卵巢癌以及膀胱癌等,并且当肿瘤细胞表面的PD-L1与T细胞等淋巴细胞表面的PD-1受体相结合后,会抑制淋巴细胞的增殖,阻碍细胞因子的释放和细胞毒性的产生,导致肿瘤特异性的T淋巴细胞产生凋亡,所以肿瘤细胞可以使用PD-L1/PD-1信号通路实现免疫逃逸。目前,打破免疫抑制信号传导途径是肿瘤免疫疗法的研究中心,针对PD-L1/PD-1信号通路的各种单克隆抗体药物现己在临床上普遍使用,总体治疗效果在30%-40%左右,部分患者在治疗过程中也出现很强的副作用以及脱靶现象。本课题以人类的非小细胞型肺癌细胞为主要的研究目标,采用RT-PCR、质粒过表达、siRNA干扰、蛋白质免疫印迹、蛋白质免疫共沉淀以及免疫荧光共聚焦等实验技术和方法,着力研究了天然小分子化合物乌苯苷在非小细胞型肺癌细胞PD-L1调控中的分子机制。我们的实验结果显示:1.在H157中筛选到下调PD-L1最为明显的天然小分子药物乌苯苷,同时我们也在H1792、A549、H460、H1299中证实,结果显示肿瘤细胞的PD-L1的水平的确随着乌苯苷处理浓度的上升而明显下降。2.乌苯苷介导肿瘤细胞产生ER Stress,乌苯苷对PD-L1的下调依赖蛋白酶体途径而非溶酶体途径。3.在H1792、A549和H1299细胞中过表达和敲低RNF19B,证实RNF19B是PD-L1的泛素连接酶。4.在H1299和A549中加入乌苯苷处理,同时过表达RNF19B以及两种形式的PD-L1,结果表明RNF19B可以增强PD-L1的泛素化;RNF19B对非糖基化的PD-L1的亲和力以及泛素化水平较强。5.在HEK293FT中过表达PD-L1的分段和RNF19B的分段,结果显示RNF19B通过252～732的结构区域与PD-L1的胞质段发生结合。同时,利用不同位点突变的泛素分子揭示RNF19B对PD-L1的泛素化形式。6.免疫共沉淀结果显示RNF19B与USP22存在相互作用,影响PD-L1在细胞内的稳定。结论:在非小细胞肺癌中用乌苯苷处理后,可以引起肿瘤细胞内部产生钙稳态的失衡导致内质网应激的发生,在内质网应激下PD-L1的修饰异常,进而被RNF19B识别并进行泛素化,最终导向蛋白酶体降解。另外,研究发现RNF19B会影响USP22与PD-L1的结合,减弱PD-L1在肿瘤细胞内的稳定性。