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目的:建立裸鼠乳腺癌模型,检测荷瘤鼠不同疾病发展阶段的循环miRNA表达量的动态变化,以及化疗前后的miRNA表达变化情况,探寻循环miRNA检测作为乳腺癌诊治标志物的可行性。在乳腺癌患者中筛选并且验证几种乳腺癌特异miRNA浓聚物的表达,并评价其在乳腺癌诊断和疾病监测中的作用。
方法:体外培养乳腺癌细胞MCF-7,取对数生长期的MCF-7细胞制成细胞悬液,注射与裸鼠右前肢内侧皮下,建立裸鼠乳腺癌模型56只,观察肿瘤生物学特征。成瘤后每周分别取血处死8只荷瘤鼠,血液提取RNA;另于成瘤2周后分别手术切除肿瘤及化疗,定期取血处死,提取血RNA。应用Q-rt-pcr法检测血中miR-21,miR-145,miR-155和miR-365的表达。另外,随机采集97名乳腺癌患者血清检测血miR-125b,miR-21,miR-145,miR-155和miR-365的表达,研究其与23个健康人志愿者血清表达量的差异。同时再选择10例乳腺癌患者进行手术前后血清miR表达的配对比较。统计分析几种血清miR表达与乳腺癌患者临床病理特点的相关性(淋巴结转移、ER、PR和P53等)。
结果:裸鼠成瘤后肿瘤随时间延长逐渐增大,以第1-2周和第3-4周肿瘤大小具有显著性差异,而2-3周生长不明显。化疗后肿瘤生长受到限制,与未化疗组相比较肿瘤大小有显著性差异。裸鼠成瘤4周内血miR-21、miR-145的表达量随荷瘤时间的不同有显著性差异,前2周两者的表达量呈升高趋势,后2周表达量逐渐下降;但仍高于无瘤裸鼠;而miR-155、miR-365的表达量在荷瘤期间的变化不显著。荷瘤鼠手术后1周与手术前比较血miR-21、miR-145、miR-155及miR-365均显著减少,而术后2周与术前比较却显著增加。手术组与非手术组比较术后1周miR-21、miR-145、miR-155及miR-365均显著降低,而术后2周各miR均显著高于非手术组。荷瘤鼠表柔比星化疗2周后与化疗前比较血中miR-21、miR-145表达显著降低,但与同期未化疗荷瘤鼠比较,化疗组血miR-21、miR-145的表达量高于未化疗组。乳腺癌患者实验中,血清miR-21、-155在乳腺癌患者表达显著高于健康组(两者p<0.0001);miR-145、-365在乳腺癌患者表达显著低于健康组(分别p<0.0001,p=0.0003)。乳腺癌手术后血清miR21和miR155与手术前比较显著减少(分别p=0.005,p=0.023)。统计结果显示miR155和miR-365与淋巴结转移相关(p=0.0101,p=0.0408),并且miR-155还与PR相关(p=0.023)。miR-145,-365与P53呈显著负相关(p=0.011,p=0.024)。相关性分析血清miR-21和miR-155的高低与乳腺癌的相关系数为0.764和0.819(p=0.000)。另外miR155/miR365的比值与乳腺癌相关系数为0.960(p=0.000)。
结论:循环血miR-21、miR-145、miR-155、miR-365的表达与乳腺癌相关,且其表达量与乳腺癌荷瘤时间长短、手术、化疗等状态变化相关。人血清miR21、miR155及miR365联合检测能够预测乳腺癌,可能作为乳腺癌肿瘤标记物的补充。