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研究背景：肝癌干细胞是肝癌组织中一小群具有干细胞样特性的细胞，与肝癌的生长、复发、转移和耐药相关，可作为今后肝癌诊断和治疗的的靶标。肝细胞生长因子（HGF）及其受体c-Met是包括肝脏在内的多种组织器官发育、修复和再生必不可少的刺激分裂原。而在肝癌组织中，c-Met的高表达和c-Met通路的异常激活与肝癌癌肿大小、分期、肝癌复发转移、患者预后等密切相关。选择性c-Met抑制剂已被证明能够在体内和体外抑制肝癌细胞生长，并且已有临床前期试验证明针对c-Met的分子靶向治疗药物对晚期肝癌患者安全有效。近年来的多项研究表明，HGF/c-Met通路参与了多种肿瘤干细胞（CSCs）的调控，甚至有报道认为c-Met可以直接作为某些肿瘤的干细胞标志物。那么HGF/c-Met信号通路是否也参与了肝癌干细胞（LCSCs）的调控将是本课题研究的内容。目的：探讨HGF/c-Met信号通路对肝癌细胞系干细胞样表型的影响。方法：1.通过Real-time PCR、细胞免疫荧光化学、Western-blot及流式细胞仪检测肝癌细胞系中c-Met的表达情况。2.通过Western-blot方法验证HGF刺激引起c-Met通路活化后，其下游信号通路的激活情况。3.采用HGF或c-Met特异性抑制剂PHA665752激活或抑制c-Met信号通路，光镜下观察细胞形态学变化，Western-blot检测细胞EMT表型变化，Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力变化，克隆形成实验检测细胞增殖能力变化。4.通过悬浮克隆球形成实验检测HGF/c-Met信号通路对肝癌细胞自我更新能力的影响，Real-time PCR检测c-Met通路激活后干细胞相关基因及LCSCs相关表面标志物的表达变化，流式细胞仪检测HGF激活c-Met通路后肝癌细胞中LCSCs比例变化。结果：1. Huh7肝癌细胞与HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞相比，在mRNA水平和蛋白水平均呈现相对低表达，而HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞呈现相对高表达。流式细胞仪检测结果显示即使在c-Met相对低表达的Huh7细胞中，c-Met+细胞的比例也达到了75.6%，而在HepG2、SMMC7721和MHCC97-H细胞中比例更高。2. HGF能够有效促进c-Met蛋白发生磷酸化，从而激活c-Met信号通路，引起其下游Erk、Akt、Stat3通路的活化。3. HGF/c-Met信号通路激活后，MHCC97-H细胞发生了EMT样形态和表型变化，Huh7和MHCC97-H细胞的迁移、侵袭、增殖能力均得到增强，而c-Met特异性抑制剂PHA665752能够抑制细胞的上述改变。4. HGF/c-Met信号通路的激活增强了Huh7和MHCC97-H细胞的自我更新能力，促进了细胞在悬浮状态下克隆球的形成，干细胞相关基因（c-Myc、Klf4、Oct4、Wnt7B）及LCSCs相关标志物（CD90、ABCG2、EpCAM）呈不同程度的表达上调，流式细胞仪检测的结果显示MHCC97-H细胞在HGF/c-Met通路激活后CD90+LCSCs和SP细胞的比例增加。结论：1. c-Met是一种在肝癌细胞系中广泛表达的具有酪氨酸激酶活性的表面受体，并且c-Met信号通路的激活会引起其下游级联放大的细胞内多条重要信号通路的活化。2. HGF刺激引起的c-Met通路激活促进了肝癌细胞EMT的发生，增强了肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力。3. HGF刺激引起的c-Met通路激活增强了肝癌细胞的自我更新能力和干细胞样特征，使细胞中的某些干细胞相关基因表达升高，并且上调了肝癌细胞中LCSCs的比例。总之，众多信号通路参与了LCSCs的调控，而我们的研究发现HGF/c-Met信号通路的异常激活对促进肝癌细胞的恶性行为和干细胞样特征发挥了重要作用。这为以HGF/c-Met信号通路和LCSCs为靶点的分子靶向治疗提供了理论基础。