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目的：本研究检测白细胞介素-1α(Interleukin-lalpha，IL-1α)和集落刺激因子-1(Colony-Stimulating Factor-1，CSF-1)对体外培养大鼠牙囊细胞骨保护素(Osteoprotegerin，OPG)表达的影响，以及IL-1α和CSF-1刺激后牙囊细胞蛋白质组的变化。
方法：
①在体视显微镜下分离出生第6～7天SD大鼠的牙囊组织，用组织块结合酶消化法体外培养大鼠原代牙囊细胞。取第四代纯化的牙囊细胞，SABC法检测波形蛋白和角蛋白表达，鉴定细胞来源。
②用50ng/ml IL-1α或CSF-1刺激体外培养的第四代牙囊细胞，western blot检测第0、1、3、6、12小时OPG的表达。用不同浓度的IL-1α(0、4、10、50、250ng/ml)或CSF-1(0、4、10、50、250ng/ml)刺激体外培养的第四代牙囊细胞12小时，western blot检测OPG的表达。
③用50ng/ml IL-1α或CSF-1刺激体外培养的第四代牙囊细胞12小时，提取细胞总蛋白，2D-DIGE分离细胞蛋白质，DeCyder V6.0软件进行图谱分析，选取平均表达改变大于1.5倍的蛋白质斑点，MALDI-TOF-MS鉴定，western blot验证部分差异表达的蛋白质。
结果：
①体外培养的大鼠牙囊细胞为成纤维细胞样细胞，波形蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性。
②western blot结果显示随着IL-1α刺激时间和浓度的增加，OPG条带逐渐加深。随着CSF-1刺激时间的增加，OPG条带变浅；各CSF-1浓度组OPG条带无明显变化趋势。
③获得了IL-1α或CSF-1刺激后牙囊细胞蛋白的双向电泳图谱，DeCyder V6.0软件分析共确认平均表达大于1.5陪的蛋白质斑点47个，质谱鉴定40个蛋白斑点。其中IL-1α组和对照组间差异表达的蛋白质斑点37个， 3 1个表达上调的蛋白主要有热休克蛋白β1(Heat shock protein beta-1、HSP27、HSP25)、波形蛋白(Vimentin)、跨膜蛋白43(TMEM43)、小G蛋白Rab-3D(GTP-binding protein Rab-3D)、6-丙酮酰-四氢生物喋呤合成酶(6-pyruvoyl tetrahydrobiopterin synthase)、肌动蛋白(Actin)等，6个表达下调的蛋白为血清白蛋白(Serum albumin)、PDZ结构域蛋白(GIPC1)、DNA引发酶大亚基(DNAprimase large subunit)、Cullin-5、细胞周期蛋白G1(Cyclin-G1)；CSF-1组和对照组间差异表达的蛋白质斑点10个，3个上调的蛋白为小G蛋白Rab-3D(GTP-binding protein Rab-3D)和α-肌动蛋白(Alphaactin)，7个下调的蛋白有Cullin-5、血清白蛋白(Serum albumin)、PDZ结构域蛋白(GIPC1)、细胞周期蛋白G1(Cyclin-G1)等。western blot结果显示50ng/ml IL-1α刺激牙囊细胞12小时后Vimentin的表达上调，50ng/ml CSF-1孵育牙囊细胞12小时后Rab-3D表达上调，与蛋白质组学分析的结果一致。
结论：
①用组织块结合酶消化法分离培养的大鼠牙囊细胞为间充质来源，可作为蛋白质组学研究的细胞模型。
②IL-1α、CSF-1均可上调大鼠牙囊细胞OPG蛋白水平。
③获得了CSF-1、IL-1α刺激后大鼠牙囊细胞的差异蛋白表达谱，筛选出Vimentin、Actin、HSP-β1、Cullin-5、Rab-3D等表达有差异的蛋白质，western blot 验证了Vimentin和Rab-3D的差异表达。