山萸肉及其提取物莫诺苷在RIR相关损伤中的研究

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背景视网膜缺血再灌注(retinal ischemia reperfusion, RIR)损伤是眼科临床疾病的病理过程,主要发生在视网膜缺血性疾病和青光眼患者之中,缺血性眼病患者,在视网膜恢复血供后,出现明显的功能障碍,造成视力下降、视神经损害及视野缺损等临床症状,甚至发生不可逆的损伤,极大破坏了视网膜的生理功能。目前对于视网膜缺血再灌注损伤的研究得知,再灌注并不能缓解视网膜细胞的损伤,反而加剧了细胞的死亡。就RIR损伤的机制而言,现阶段研究侧重于兴奋性氨基酸学说、钙通道学说、细胞凋亡学说、炎症反应学说、氧自由基学说、一氧化氮学说、基因凋亡学说等。综其机制,视网膜缺血再灌注损伤的发生并非单一因素,治疗上也要从多种药物着手。探讨并尝试用不同药物进行治疗符合RIR损伤的诸多机制学说。然中医药在治疗RIR损伤引起的相关临床疾病的研究尚处于探索阶段,还有很大空间值得挖掘。近年来,大量实验资料证明,山萸肉提取物莫诺苷对抑制神经细胞的凋亡有保护作用。以此推论,在治疗视网膜缺血再灌注损伤引起的前部缺血性视神经病变的方药中加入山萸肉,可提高临床疗效,进一步验证莫诺苷对视网膜神经节细胞的保护作用。目的回顾性的调查分析临床中山萸肉在前部缺血性视神经病中的使用情况,总结中药山萸肉在RIR损伤造成的这一类疾病中的用药规律。通过本实验思路及方法的建立,初步探索山萸肉提取物莫诺苷对低氧低糖状态下视网膜神经节细胞活性的影响,为莫诺苷相关制剂药物在临床的应用提供理论基础及实验依据。方法回顾性研究,选择2010年11月~2013年12月之间治疗前部缺血性视神经病变的病例进行系统的归纳、总结。根据原始病例记载的用药情况,结合患者诊疗治疗过程中的视力、视野,分析统计使用山萸肉的证型、山萸肉的使用时间及山萸肉使用量,总结山萸肉在治疗该病中的临床思路及作用。采用SPSS18.0进行数据的统计和处理。计量资料数据以x±s表示,采用单因素方差分析(ANOVA),两两比较采用LSD-t法检验。实验室方法:采用免疫荧光的方法鉴定RCG-5细胞,同时在低氧低糖下进行视网膜神经节细胞RGC-5培养,继而放置到不同浓度的莫诺苷培养基(低剂量10μmol/L、高剂量100μmol/L)及对照组培养基中,MTT法检测细胞活性。结果对临床回顾性病例统计结果发现,前部缺血性视神经病就诊总病例数232例,应用含山萸肉方剂治疗方案的病例数共37例,应用含山萸肉的病例约占总病例数的15.95%。在应用含山萸肉的病例中,以“肝肾阴虚兼血脉瘀滞证”及“气阴两虚兼目络瘀滞证”的患者病例数居多,其次为:“气虚血瘀证”、“气虚血瘀证”、“肝郁气滞证”。免疫荧光法鉴定RCG-5细胞:细胞浆为棕黄色,细胞核为蓝紫色。莫诺苷对视网膜神经节细胞的影响MTT实验:①在低氧低糖状态下,可引起视网膜神经节细胞活性降低;②低氧低糖组与正常细胞组比较,其各时间段0D值显著减少(P<0.05);③莫诺苷组10μ g/ml作用24h其0D值较低氧低糖组对照显著增加(P<0.05);④随着莫诺苷浓度的增加,莫诺苷高浓度组100μ g/ml各时间段的0D值均较缺氧组显著增加,其0D值较缺氧组细胞增殖活性最高;⑤莫诺苷可提高低氧低糖引起的神经节细胞活性降低的作用,对细胞的增殖有一定的促进作用,并呈剂量相关依赖性。结论山萸肉在大多数治疗前部缺血性视神经病方剂中的地位处于佐、使地位。莫诺苷可提高低氧低糖引起的神经节细胞活性降低的作用,对细胞的增殖有一定的促进作用,并呈剂量相关依赖性。
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