鸡坏死性肠炎(Necrotic enteritis,NE)是由产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)引起的并常继发或伴于鸡球虫病(球虫感染)/鸡球虫病活卵嚢疫苗接种的一种以肠道黏膜上皮细胞坏死为特征的肠道传染病。近年来随着对饲料中抗菌和抗球虫药物添加剂使用的法律限制,大量使用小麦等代替玉米作饲料基础日粮等因素,鸡坏死性肠炎的发病率和流行率在全球范围内均呈升高趋势。研究结果表明,从外观健康鸡、病鸡及不同地区分离的C.perfringens菌株在遗传上存在显著多态性,且菌株的致病性与基因型密切相关。为探明我国主要养鸡地区鸡群中C.perfringens分离株的遗传多态性,本研究从我国主要养鸡地区的外观健康鸡、异常粪便及病死鸡肠道采集样本,分离C.perfringes进行毒素基因和抗药谱检测,并应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)进行基因型分析,为鸡坏死性肠炎的防控积累基础数据资料。1.为了解我国不同地区鸡源C.perfringes的分布情况,从7个省17个地区的692份样品中分离到214株C.perfringens,分离率为31%。实验结果显示其中206株为A型C.Perfringens,8株为C型。在A型菌株中利用单一 PCR检测发现有87株具有β2毒素基因,阳性检出率为41%;5株具有NetB毒素基因,阳性检出率为2.3%。以最小抑菌浓度(MIC)检测这些分离菌株的抗药性及抗药谱,结果显示那西肽对所有分离菌株均具有良好的抑菌效果,四川德阳(2013)、四川眉山(2013)和广东鹤山(2013)的菌株对11种药物均表现出药物敏感,而广西桂林(2014)的菌株仅对那西肽表现出药物敏感。2.应用PFGE分型技术,对上述214株中的108株C.perfringens进行基因分型分析。在对文献方法进行优化的基础上,根据相似度高于75%归为同一基因簇,高于99%认为是同一基因型的分型原则,所分析的108个菌株可分为15个基因簇,80个基因型。实验表明PFGE图谱能够较好的反映分离菌株的遗传特性,当相似度为50%时,所有菌株能够聚在一起。菌株的亲缘关系与毒素型无相关性,而与地理位置密切相关;同一地区具有明显肠道炎症或NE病变的鸡分离的C.perfringens基因型比较单一,趋同均质,而分离自健康鸡或无明显肠炎症状的鸡的C.perfringens基因型比较多样,甚至分离自同一个体的不同菌株基因型也不相同。