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目的:随着白内障手术技术的不断提高及仪器设备的不断更新,手术并发症如角膜失代偿、继发性青光眼等眼病逐渐减少,而后囊混浊(posteriorcapsule opacification,PCO)成为影响术后远期视力恢复的突出问题。成人PCO的发生率约为20%~50%,儿童则几乎达到100%,手术组的年龄越小,发生率越高。虽然可以通过二期手术或YAG激光后囊膜切开术治疗,但不仅增加了额外费用,而且不可避免会出现新的并发症。因此人们一直在探索安全、有效的药物治疗PCO。现代白内障摘除术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)的黏附、增殖在PCO的形成过程中起着极为重要的作用,因此阻断LECs的黏附,减少LECs增殖,是发展防治PCO药物的一个重要策略。含RGD序列的多肽,尤其是蛇毒去整合素(disintegrin)在抗肿瘤细胞黏附和增殖的作用,引起了人们的关注,逐渐将此类药物应用于其它有关细胞黏附的领域,但使用去整合素干预PCO发展的研究国内外均鲜见报道。为研究去整合素对LECs的作用,本实验应用体外细胞培养技术,采用MTT法,观察去整合素Kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04黏附、增殖的抑制作用,为Kistrin治疗PCO提供实验依据。方法:实验分为两部分:①检测Kistrin对SRA01/04细胞黏附的影响:将细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基悬浮,在37℃、5%CO2条件下,与5个不同浓度的去整合素Kistrin(40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml、320ng/ml、640ng/ml)和RGD肽(0.125mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml)一起孵育30min。然后接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板,细胞浓度为2.5×104个/孔,在37℃、5%CO2条件下,一起孵育90min后,用PBS轻洗各孔两次,弃去未贴壁细胞,MTT法测定各孔吸光度值。②检测Kistrin对SRA01/04细胞增殖的影响:将悬浮细胞接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板培养,细胞浓度为1×104个/孔,12h后弃原培养液,换无血清DMEM/F12培养液继续培养24h,使细胞同步化。弃旧培养液,加入同上浓度的Kistrin和RGD肽溶液,37℃、5%CO2条件下共同孵育,分别于24h,48h,72h后,MTT法测定各孔吸光度值。结果:1、Kistrin和RGD肽对SRA01/02细胞在鼠尾胶原基质上的黏附有一定的抑制作用,并呈浓度依赖关系,40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml,、320ng/ml、640ng/ml浓度组Kistrin的黏附抑制率分别为3.7%、7.8%、15.9%、22.7%、33.4%,0.125mg/ml、0.25 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml浓度的RGD肽的黏附抑制率分别为5.1%、12.2%、19.0%、25.9%和35.1%。除最低浓度外,各组平均OD值与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。Kistrin组半数抑制浓度(IC50)=918.1ng/ml,RGD组IC50=2.7mg/ml。Kistrin对SRA01/04细胞的抗黏附作用比RGD肽强约3.0×103倍。2、Kistrin和RGD肽对SRA01/04细胞的增殖具有较强的抑制作用,并且随着质量浓度增加和作用时间的延长,抑制增殖的作用也显著增强。抑制作用在48h,72h均与24h之间有显著性差异(P<0.05)。Kistrin和RGD肽对SRA01/04细胞干预24h、48h、72h后的抑制增殖IC50分别为640.5ng/ml、429.8 ng/ml、303.0 ng/ml和2.03mg/ml、1.27 mg/ml、0.87 mg/ml。在这三个时间点内,Kistrin的对SRA01/04细胞的抗增殖作用较RGD强2.9×103~3.2×103倍。3、较高浓度Kistrin对体外培养的SRA01/04细胞有诱导其凋亡的作用。结论:1、本研究通过MTT法证实了Kistrin和RGD肽对SRA01/04细胞有黏附、增殖抑制作用。黏附抑制作用随药物浓度增加而增强;增殖抑制作用随药物浓度及干预时间增加而增强,48h和72h均与24h之间有显著性差异,以72h增殖抑制作用最明显。2、在抑制SRA01/04细胞黏附和增殖方面,Kistrin的作用均较RGD肽强2.9×103倍以上。3、较高浓度Kistrin可诱导SRA01/04细胞凋亡。4、此研究为使用去整合素Kistrin防治PCO提供了实验依据。