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急性脊髓损伤可分为原发性损伤和继发性损伤两个阶段。原发性损伤是在受伤的一瞬间由外力产生的决定性的、不可逆的损伤,无法针对其进行有效的治疗。继发性损伤是脊髓原发性损伤之后由于各种因素引起的脊髓再损伤,所产生的脊髓损害远远超过了原发性损伤。由于继发性脊髓损伤的过程为渐进性,这就为药物治疗脊髓损伤提供了机会。 近十几年来,随着对脊髓损伤研究的深入,大量有关继发性损伤的学说被提出,其中,自由基损伤、细胞内钙超载和兴奋性氨基酸毒性作用等学说已被广泛接受。近年来的研究发现,凋亡存在于脊髓损伤中,且在继发性损伤中发挥了非常重要的作用。凋亡(apoptosis)是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,由基因调控的主动死亡过程。由于凋亡是一个程序性过程,存在加以调控的可能性,因而成为当前研究的热点。关于目前临床常用麻醉药对脊髓损伤后细胞凋亡的影响,尚未见报道。因此,研究麻醉药对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制,对于指导临床用药、减轻继发性损伤和改善愈后,具有重要意义。 本研究以临床常用的全麻药异丙酚为研究对象,采用原位末端标记法(TUNEL法)、碘化丙啶(PI)/Heochst33342双染法和免疫组化等方法,研究了异丙酚对原代培养脊髓神经元和大鼠脊髓损伤后细胞凋亡及其相关基因表达的影响,发现异丙酚可通过调节凋亡相关基因bax和bcl-2的表达,抑制细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤,保护脊髓功能。 主要研究结果如下: 1、通过对原代培养脊髓神经元一段时间的生长形态观察,发现体外脊髓神经元在培养的第7天是神经元形态及功能测试的最佳时期,为进行相关研究提供了有意义的参考依据。 2、肿瘤坏死因子一a(TNF-。)可通过抑制体外培养脊髓神经元bclZ 表达,增强 bax表达,增加 bax/bclZ比值,促进原代培养脊髓神经元凋亡。 3、异丙酚可通过促进 bclZ WJ表达、抑制 bax的表达,从而降低bax/bclZ的比值来抑制山TNF-a诱导的原代培养脊髓神经元凋亡,且呈现出一定的剂量效应关系。 4、通过对大鼠脊髓损伤后血浆丙二醛(**A) 和超氧化物歧化酶(S OD)的检测发现,氧自山基引起的脂质过氧化损伤在脊髓损伤后的继发性损伤中起重要作用,而异丙酚则可通过减轻氧自山基引起的脂质过氧化损伤来保护脊髓。 5、通过对大鼠脊髓损伤后一段时间内斜板实验和 BBB评分,发现脊髓损伤后 3 0 nh n给予异丙酚 6 0 m g·k g-’·h‘可改善大鼠行为功能的恢复,其中B*B评分法是一种更客观、更能具体反映功能恢复情况的评分方法。 6、采用TUNEL法检测了大鼠脊髓损伤后细胞凋亡,进一步证实了脊髓损伤后细胞凋亡的存在;而损伤后给予异丙酚则可抑制凋亡的发生。