低强度脉冲超声干预大鼠骨质疏松症及高脂血症的实验研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:fzzlz
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目的:本实验利用大鼠骨质疏松症模型及高脂血症模型,评价低强度脉冲超声(LIPUS)对骨密度、骨组织微结构、骨生物力学特性的影响,以及超声对血清胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-c)的调节作用,明确LIPUS干预骨质疏松症及高脂血症的效果,为LIPUS预防骨质疏松症结合血脂紊乱症、及高脂血症引发的血管粥样硬化症的进一步研究打下基础。此外,评价水下法全身性超声施加方式的可行性,为自行设计的超声设备的改进提供依据。方法:1.骨质疏松症实验部分:对健康雌性3月龄SPF级未育Wistar大鼠实施双侧卵巢切除术(OVX)建立大鼠骨质疏松症模型。实验设置超声组(OVX-US)、空白对照组(OVX-CON)、雌激素对照组(OVX-ESG)、假手术对照组(Sham-CON),其中超声组内分低剂量超声组(OVX-US-L)、中剂量超声组(OVX-US-M)、高剂量超声组(OVX-US-H)(n=6/组)。手术后取切除下的卵巢做组织学HE染色,取血检测雌二醇(E2)含量确定手术成功。术后3个月建模完成,开始对各组大鼠施加超声/无/药物干预。超声干预参数及剂量为:频率40kHz,脉冲占空比1:4,强度分3级可调。超声设备加载电压220V,电流为0.5A、0.6A、0.7A三级可调。介质水温为38℃。超声辐照模式:每日6min,每周6天,连续12周。药物对照组(OVX-ESG)采用结合雌激素片溶液灌胃,剂量为0.018mg/100g体重,5天/周,持续灌胃12周。干预周期结束后,采用双能X-线吸收法测量腰椎区骨密度(BMD),取两侧股骨分别进行组织学切片HE染色及骨组织生物力学检测,得到骨组织形态学图像及最大载荷(Fmax,N)、弹性模量(Emod,N/mm)。取OVX-US-H组大鼠各主要脏器做组织学切片HE染色,镜下观察作超声安全性评价。2.高脂血症实验部分:对雌性9月龄SPF级未育Wistar大鼠实施脂肪乳剂灌胃建立大鼠高脂血症模型。实验设置超声组(US)、高血脂组(HLP)、辛伐他汀对照组(SV)、正常对照组(CON)(n=6/组)。脂肪乳剂按1ml/100g体重剂量灌胃,1次/天,连续灌胃10天。随即取血检测模型大鼠血清中血脂四项水平,确定高脂血症模型建成。随后开始对各组大鼠施加超声/无/药物干预。超声参数为:电流0.7A(为骨质疏松模型组实验结果最优组的参数),其余参数同骨质疏松实验。超声辐照每日6min,每周6天,连续2周。采用舒降之(?)辛伐他汀片作为药物对照,灌胃剂量为0.16mg/100g体重,6天/周,持续2周。干预结束后,取血检测血清TC、TG、LDL-c、HDL-c水平。所有数据均用(x±SD)表示,采用SPSS v13.0统计软件处理。组间两两比较用单因素方差(one-way ANOVA)分析,方差齐用LSD检验,方差不齐用Dunnett-T检验,α=0.05。结果:1.骨质疏松症实验部分:(1)骨密度(BMD):超声组与OVX-CON组相比, OVX-US-L及OVX-US-H两组的骨密度显著升高(p<0.01);与OVX-ESG组及Sham-CON组相比,BMD均无明显差异(p=0.323,p=0.386)。与OVX-CON组相比,OVX-US-M组的BMD略有升高,但差异无统计学意义,且该组BMD显著低于OVX-ESG组(p<0.05)。(2)弹性模量(Emod)及最大载荷(Fmax):与OVX-CON组相比,OVX-US-H组的Emod和Fmax均明显升高(p<0.0001);与OVX-ESG组比较,OVX-US-H组的Emod没有差异,Fmax显著升高(p<0.05)。OVX-US-L组和OVX-US-M组的Emod和Fmax都有不同程度的升高,但升高的幅度均小于OVX-US-H。(3)骨组织形态学:OVX-CON组的骨小梁较细,分布稀疏,连续性较差。OVX-ESG与Sham-CON两组的骨小梁结构明显粗壮,分布紧密,结构完整。与上述三组相比,OVX-US-M和OVX-US-H两组的骨小梁状态较好,较OVX-CON组明显更粗,且分布密度更高,整体状态与OVX-ESG组和Sham-CON组相似。(4)各脏器组织病理形态学观察:未见组织病理学改变,未见出血点,细胞结构完整。2.高脂血症实验部分:与HLP组相比,US组的血脂四项指标均呈下降趋势,其中TC、TG、LDL-c浓度显著降低(P<0.001),HDL-c浓度略微降低(P>0.05),LDL-c/HDL-c值降低,但无统计学差异。US组的TG浓度甚至显著低于阳性药物SV组(p<0.05)。与CON组相比,US组的TC、TG、LDL-c、HDL-c四项指标均无显著差异(P>0.05)。结论:(1)低强度脉冲超声能够有效增加骨质疏松大鼠的骨密度,改善骨组织微结构状态,增加骨强度及骨劲度,减缓或抑制骨量丢失。(2)低强度脉冲超声能够快速、有效的降低高脂血症大鼠的血脂(TC、TG、LDL-c)浓度。(3)本实验采用的超声参数及剂量均具有良好生物安全性,其中,0.7A电流产生的超声强度对于两种模型作用效果最优。(4)水下法全身性超声辐照是一种安全、有效的超声施加方式。
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