载藤黄酸介孔纳米粒用于化疗光热协同治疗乳腺癌的研究

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目的:乳腺癌作为女性中最常见的癌症,是女性健康的首要隐患。现有的治疗手段仍存在选择性差、毒副作用较大、易产生耐药性等挑战,严重制约了乳腺癌的治疗效果。基于纳米平台的新型递药系统的快速发展和多种治疗手段的综合应用,在增强疗效的同时可以减轻现有治疗手段给患者带来的毒副作用,为乳腺癌的临床治疗带来了新的希望。本文旨在创制一种可实现化疗和光热联合治疗的负载抗癌活性天然产物藤黄酸(GA)的介孔聚多巴胺纳米粒(GA@MPDA),并分别从细胞和动物水平系统研究了GA@MPDA对乳腺癌的抗肿瘤效果和作用机制。研究方法:首先,利用生物相容性较好和生物可降解的多巴胺通过一锅法制备介孔聚多巴胺(MPDA),并通过搅拌共孵将GA负载在MPDA上,经过处方和工艺优化得到稳定均一的GA@MPDA;接下来,通过红外、紫外方法表征GA@MPDA纳米粒的载药情况,并通过马尔文粒度仪和透射电镜对MPDA和GA@MPDA的粒径、形貌及结构进行考察;另一方面,利用温度计实时记录激光照射10 min内纳米粒的温度变化,以评价其体外的光热转换效应。然后,在细胞水平上研究GA@MPDA对4T1乳腺癌细胞的影响,主要通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分别定量和定性考察细胞摄取、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)、胞内Ca2+浓度、细胞凋亡及细胞毒性等。最后,通过建立小鼠乳腺癌模型考察GA@MPDA的体内光热转换效应、体内生物分布、体内抗肿瘤效果、体内的生物安全性及对抗肿瘤免疫反应的影响。结果:首先,本文成功地制备了平均粒径分别为186.821±16.171 nm和323.306±2.121 nm的MPDA和GA@MPDA纳米粒,在体内外均显示出较好的光热转换性能。其次,MPDA可以促进4T1细胞对药物的摄取,GA@MPDA在加以红外激光照射后具有增强的抗肿瘤活性,可通过促进细胞凋亡、增加胞内的ROS水平、降低线粒体膜电位、增加胞内的Ca2+浓度等途径抑制乳腺癌细胞的生长和迁移。再次,MPDA通过静脉注射后可选择性的富集到小鼠体内肿瘤部位,在注射后约6h达到峰值;GA@MPDA联合红外激光照射后对小鼠原位乳腺癌的治疗效果显著,平均抑瘤率高达83.01%;病理检查、血常规和生化检测显示GA@MPDA的生物安全性较好,无明显毒副作用。最后,GA@MPDA联合红外激光照射可以促进小鼠体内的肿瘤免疫源性细胞死亡(ICD),从而增强小鼠自身的抗肿瘤免疫反应。结论:本文创制了一种多功能的纳米介孔药物GA@MPDA,可通过光热转换、诱导细胞凋亡、提高胞内ROS和Ca2+浓度、诱导ICD等多种途径发挥抗乳腺癌的作用。此外,GA@MDPA也具有较高的生物安全性,显示了潜在的临床转化价值。
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