【摘 要】
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[目的]建立低强度聚焦超声刺激小鼠伏隔核的方法,采用不同声压进行超声刺激并检测伏隔核区神经元超微结构改变情况。[方法]SPF级成年C57BL/6小鼠160只,雄性,体重18-22 g（6-7周）,动物在移动饲养屏障中适应性饲养一周。脑区显微注射确定NAc在颅骨表面投映点的位置坐标后,进行超声刺激小鼠NAc,刺激结束后取脑组织行HE、尼氏染色,c-Fos免疫荧光检测,初步建立超声刺激方法;随后将小鼠
【基金项目】
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云南省科技厅-昆明医科大学联合专项重点项目（202001AY070001-004）；
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[目的]建立低强度聚焦超声刺激小鼠伏隔核的方法,采用不同声压进行超声刺激并检测伏隔核区神经元超微结构改变情况。[方法]SPF级成年C57BL/6小鼠160只,雄性,体重18-22 g（6-7周）,动物在移动饲养屏障中适应性饲养一周。脑区显微注射确定NAc在颅骨表面投映点的位置坐标后,进行超声刺激小鼠NAc,刺激结束后取脑组织行HE、尼氏染色,c-Fos免疫荧光检测,初步建立超声刺激方法;随后将小鼠随机分为5个超声刺激组和1个假刺激组,每组20只。5个超声刺激组声压不同,分别为107kpa、209kpa、399kpa、473kpa、590kpa,其余条件相同:PRF=1000Hz,DC=50%,每天 10 分钟,持续10天。超声辐照刺激结束后24小时内取脑组织,透射电子电镜观察神经元超微结构的改变;高尔基染色观察神经元树突长度以及树突棘密度的变化。[结果]1、脑区显微注射结果显示:与对照组相比,实验组小鼠脑片前连合及周围的NAc区均有甲苯胺蓝染液渗入,并被染成蓝色。2、免疫荧光结果显示:LIFU辐照刺激能够明显提高NAc区神经元c-Fos表达,与假刺激组相比,超声刺激组组表达c-Fos神经元比例显著提高（P<0.001）。3、HE、尼氏染色结果显示:与对照组相比,HE染色超声刺激组没有造成小鼠脑组织NAc出血,组织损毁等损伤现象;尼氏染色未发现小鼠NAc有明显的神经元减少或丢失。4、透射电子显微镜结果显示:与假刺激组相比,随着声压的增加,超声刺激组小鼠NAc区神经元胞核水肿,染色质逐渐减少,核质界限越来越模糊,细胞质内线粒体空泡化现象越来越严重,内嵴排列紊乱甚至消失,有髓神经纤维明显水肿。5、高尔基染色结果显示:与假刺激组相比,超声刺激组随着声压（107kpa、209 kpa、399 kpa）的增加,小鼠NAc区神经元树突棘密度随之增大（P<0.05）,神经元树突长度没有改变（P>0.05）,但当声压继续增加到473kpa、590kpa时,小鼠NAc区神经元树突棘密度、长度反而持续减小（P<0.001）。[结论]1、证实小鼠NAc在颅骨表面投映点的位置坐标为:M/L:+0.50mm,A/P:+1.18mm。2、LIFU刺激能量在590kpa范围内辐照是安全的,未造成NAc组织损毁、神经元减少或丢失。3、LIFU辐照刺激对小鼠NAc区神经元突触可塑性具有双向调控作用。声压590kpa时,小鼠NAc区神经元树突棘密度、神经元树突长度反而减小。
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