【摘 要】
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目的:建立黑参HPLC指纹图谱以及利用一测多评法(QAMS)测定黑参中人参皂苷的含量。采用LC-Q-TOF-MS法对灌胃给药后的大鼠血清、尿液以及粪便中的成分进行定性分析。通过LC-MS/MS测定黑参中七种人参皂苷在大鼠体内的血药浓度,并阐述药动学规律。以期阐明黑参的药效物质基础、作用机制及其科学内涵。方法:1.黑参HPLC指纹图谱的建立以及利用一测多评法(QAMS)测定黑参中人参皂苷的含量采用W
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目的:建立黑参HPLC指纹图谱以及利用一测多评法(QAMS)测定黑参中人参皂苷的含量。采用LC-Q-TOF-MS法对灌胃给药后的大鼠血清、尿液以及粪便中的成分进行定性分析。通过LC-MS/MS测定黑参中七种人参皂苷在大鼠体内的血药浓度,并阐述药动学规律。以期阐明黑参的药效物质基础、作用机制及其科学内涵。方法:1.黑参HPLC指纹图谱的建立以及利用一测多评法(QAMS)测定黑参中人参皂苷的含量采用Waters System C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-纯水(B)为流动相;梯度洗脱;检测波长为210 nm;流速为1.0 m L·min-1;柱温30℃;进样量10μL;建立黑参HPLC指纹图谱,利用一测多评法测量11批黑参样品中9种人参皂苷的含量。2.UPLC-Q-TOF-MS技术分析黑参在大鼠血清、尿液以及粪便中的化学成分采用Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,采用乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)作为流动相,梯度洗脱。流速:0.3 m L·min-1;柱温:30℃;进样量:10μL。电喷雾离子化源(ESI);检测模式为正(ESI+)/负(ESI-)离子检测模式,对灌胃黑参提取物后,大鼠的血清、尿液以及粪便中的成分进行定性分析。3.UPLC-MS/MS同时测定灌胃黑参提取物后大鼠血浆中七种人参皂苷的浓度及其药动学研究采用岛津Nexera X2 LC-30AD超高效液相色谱系统进行分离。流动相为A:H2O;B:甲醇。柱温40℃,流速为0.3 m L·min-1,进样量5μL。梯度洗脱。采用5500 QTRAP质谱仪(AB SCIEX)进行分析,正离子模式(ESI+)。采用MRM模式检测,测定灌胃黑参提取物后,七种人参皂苷在大鼠体内的血药浓度,并用DAS 2.0软件拟合药动学参数,绘制药时曲线。结果:1.黑参HPLC指纹图谱的建立以及利用一测多评法(QAMS)测定黑参中人参皂苷的含量指纹图谱确定了12个共有峰,相似度均在0.900以上,聚类分析以及主成分分析可将11批黑参样品大致分为3类,结果表明通过一测多评法测得的含量与外标法测定的含量无显著差别。2.基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析黑参在大鼠血清、尿液以及粪便中的化学成分鉴定出了黑参提取物中17种人参皂苷成分,大鼠灌胃给予黑参提取物后分别在血清、尿液以及粪便中检测到12种、8种以及11种原型皂苷,并在粪便中检测到3种代谢产物。3.UPLC-MS/MS同时测定灌胃黑参提取物后大鼠血浆中七种人参皂苷的浓度及其药动学研究(1).黑参中的人参皂苷Rc以及Rf在大鼠体内相比于其他五种皂苷较难吸收、消除较慢。(2).人参皂苷Rh4以及Rk3在大鼠体内的吸收多出现重吸收峰。(3).通过与文献报道的研究比较发现黑参中的大部分人参皂苷相比于生晒参和红参在体内吸收及消除较慢。结论:本实验建立了黑参的HPLC指纹图谱以及人参皂苷含量测定的一测多评方法,实验证明本方法具有良好的经济适用性以及准确性,同时可为之后黑参的质量控制提供新的方法和思路。同时首次阐述了黑参中的人参皂苷类成分在大鼠体内的吸收以及代谢情况,以及几种常规人参皂苷以及黑参特有稀有皂苷的药动学规律,可为黑参的药效物质基础研究提供可靠的科学评估,为黑参的进一步开发利用提供依据。
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