美洲大蠊提取物对DSS诱导UC小鼠氧化应激及NRF2/HO-1通路的影响

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目的:分析美洲大蠊提取物中氨基酸的组成及含量;通过美洲大蠊提取物对DSS诱导的UC小鼠的干预探究其通过调节氧化应激水平缓解UC的作用机制及抗氧化应激活性成分,为美洲大蠊提取物在UC中的开发与应用提供一定依据。方法:(1)采用LC-MS/MS对美洲大蠊提取物进行氨基酸含量分析;(2)采用预给药后造模的方式进行美洲大蠊提取物药效实验,以美沙拉嗪为阳性对照组,连续灌胃给药21 d。第8 d起给予2.5%DSS自由饮水造模,连续14 d。通过测定DAI评分,结肠长度,HS评分评价美洲大蠊提取物对UC疗效;通过ELISA检测小鼠血清IL-6,IL-10,TNF-α,IL-17评价美洲大蠊提取物对UC小鼠抗炎作用;通过WB检测总NRF2、核NRF2和胞质NRF2、总GCLM、NQO1,HO-1和GPX2的表达评价美洲大蠊对UC小鼠的氧化应激的影响及其作用机制。(3)采用重组人TNF-α刺激诱导NCM460细胞氧化应激模型,测定细胞ROS、SOD、MDA和GSH的表达,WB检测GCLM、NQO1、HO-1和GPX2的表达评价美洲大蠊提取物和氨基酸混合物对NCM460细胞的抗氧化应激效果及其作用机制。结果:(1)美洲大蠊提取物中丙氨酸、甘氨酸、色氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的含量分别为15.7 mg/g、11 mg/g、0.779 mg/g、3.03 mg/g、3.38 mg/g、6.03 mg/g、8.09 mg/g、2.99 mg/g、7.57 mg/g和3.64 mg/g。(2)美洲大蠊提取物能够减轻UC小鼠结肠缩短和减重症状,能够显著降低DAI、和HS评分,下调血清IL-6,TNF-α和IL-17表达水平,增加IL-10的表达(P<0.05或P<0.01),减轻炎症,并通过促进NRF2核转位,调控下游抗氧化应激蛋白GCLM、NQO1、HO-1和GPX2的表达来减轻UC小鼠结肠氧化应激。(3)美洲大蠊提取物可以缓解TNF-α诱导的氧化应激,其中脯氨酸和甘氨酸具有一定的体外活性,可作为美洲大蠊提取物有效活性部位质控鉴定指标的候选物。结论:美洲大蠊提取物可以通过抗氧化应激的作用来治疗DSS诱导的小鼠UC,其抗氧化应激机制与促进NRF2核转位,提高下游相关抗氧化应激蛋白表达有关。其中,甘氨酸和脯氨酸可作为美洲大蠊提取物有效活性部位质控鉴定指标的候选物。
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