狭叶锦鸡儿的组织培养技术研究

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狭叶锦鸡儿(Caragana stenophylla Pojark.)是一种抗性极强的锦鸡儿属落叶灌木,具有多种资源价值及生态价值,但存在土壤种子库种子数量逐年递减、传统育苗及无性根蘖、扦插繁殖均有缺陷等问题。为构建高效的狭叶锦鸡儿快繁体系来解决狭叶锦鸡儿目前面临的诸多繁殖问题,本研究以狭叶锦鸡儿成熟种子为试验材料,利用组织培养技术及相关统计方法分析探究(1)以狭叶锦鸡儿成熟种子为外植体,涵盖外植体的消毒方法及不同质量浓度植物激素对其不定芽诱导、增殖继代、生根过程中的作用及炼苗5个试验过程。(2)以狭叶锦鸡儿无菌苗为外植体,分别探究幼茎、子叶及下胚轴的愈伤组织诱导及植株再生。(3)以狭叶锦鸡儿无菌苗为外植体,分别探究下胚轴和子叶的不定芽诱导及植株再生。研究结果如下:(1)以狭叶锦鸡儿成熟种子为外植体,分别探究消毒、初代诱导、增殖继代、生根和炼苗五个试验过程中:75%乙醇处理30s配合以2%Na Cl O溶液处理12min,种子去皮接种是狭叶锦鸡儿以种子为外植体的最佳消毒方法,污染率为2.23%,存活率为66.67%;不定芽诱导以6-BA 0.50mg/L+NAA 0.10 mg/L条件下的芽长势最好,诱导率最高为91.11%;不定芽增殖继代以6-BA 0.50mg/L+NAA 0.20 mg/L条件下的效果最好,增殖系数为3.26,平均株高为3.6cm;生根诱导中以1/2MS为基本培养基添加IBA 0.20 mg/L+NAA 0.10 mg/L条件下的生根效果最好,诱导生根率最高为85.4%;将生根苗开瓶炼苗2-3d后,移栽于草炭土:珍珠岩:蛭石=5.5:0.5:1的混合基质中,植株成活率达95.53%。(2)以狭叶锦鸡儿无菌苗为外植体,分别探究幼茎、子叶及下胚轴的愈伤组织诱导及植株再生过程中:狭叶锦鸡儿无菌实生苗的幼茎、子叶及下胚轴均适合愈伤组织的诱导。其中:下胚轴更适合于暗培养下进行愈伤诱导,最适培养基为6-BA0.50mg/L+NAA 2.00 mg/L,诱导率为100%;子叶和幼茎则更适合在光培养下进行愈伤诱导,最适培养基为6-BA 0.50mg/L+NAA 1.50mg/L,诱导率分别为100%和97.67%;随着继代次数的增加,愈伤组织均有明显的增殖现象,但活力却在不断下降,老化褐变率不断升高;在不同的芽分化培养基中,适合狭叶锦鸡儿愈伤组织诱导不定芽的培养基为6-BA 2.00mg/L+NAA 0.50mg/L,诱导率为15.67%。(3)以狭叶锦鸡儿无菌苗为外植体,分别探究下胚轴和子叶的不定芽诱导及植株再生过程中:适合下胚轴诱导不定芽的激素浓度组合为6-BA 0.50mg/L+IBA0.50mg/L,诱导率为27.22%;适合子叶诱导不定芽的激素浓度组合为NAA 0.05mg/L+TDZ 0.20mg/L,诱导率为19.45%。本研究以狭叶锦鸡儿成熟种子为起始材料,构建了一套较为完整的狭叶锦鸡儿组培快繁体系,尤其以种子诱导不定芽实现植株再生的各项主要技术指标已满足了快速繁育苗木的需要,其关键技术措施可直接运用于大规模生产中,也可为后期狭叶锦鸡儿进一步的遗传转化研究奠定理论基础。
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