毛木耳交配型系统研究

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毛木耳(Auricularia cornea)是我国重要的食用菌之一。食用真菌的交配型研究,在遗传和育种上有着重要的意义。一直以来对于毛木耳交配型存在争议,本研究在对毛木耳单孢菌株进行杂交配对及基因组测序,鉴定出控制其交配型的基因,并进一步分析它们。主要研究成果如下:
  1)采集了共5个品种毛木耳子实体,包括漳耳4328,漳耳43012,桂耳1号,781,天宝58五个品种菌株。每个品种单孢分离得到20-30个单孢菌株。其中,对漳耳43012进行原生质体单核化得到单核体B02菌株。对所得单孢进行杂交配对,观察锁状联合,品种内得到两个不同的交配型类型菌株。
  2)对于5个品种的毛木耳,从不同交配型中选出一个单孢二代测序。共测序菌株9个。对于单核体B02进行二、三代测序,二代校正三代组装。得到毛木耳的基因组大小在70-78Mb。
  3)对毛木耳基因组分析,找到8个HD基因,其中6个在所有菌株中相似度在90%以上,靠近MIP基因的两个HD基因存在差异,在漳耳4328,桂耳一号找到4个STE3基因,漳耳43012,天宝58找到3个STE3,菌株781找到2个STE3基因,并对不同菌株进行线性比对确定各基因相对位置。除桂耳1号单孢外,其他品种菌株单孢之间STE3基因无差异,在STE3基因上下游寻找到的信息素前体基因也无差异。对STE3基因进行进化树分析,将STE3基因分为两类。对STE3基因HD基因进行PCR验证,均能得到相应的条带。综上,毛木耳中存在一个交配型A位点,1-3个交配型B亚位点.对HD基因和STE3基因进行连锁性分析发现,这两个基因位于同一个contig上,可能存在连锁性。
  4)对已测序9个单孢进行两两杂交,观察锁状联合,均可找到锁状联合,进行出菇实验也证明9个单孢间可以两两亲和。不同菌株HD基因存在差异,STE3基因相同或者不同都可亲和产生锁状联合。
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