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本文研究了PI3K/AKT信号传导途径对人低分化鼻咽癌细胞系在CNE-2Z生长、增殖和凋亡的作用及其可能机制,通过抑制PI3K/AKT信号传导途径观察对鼻咽癌细胞系CNE-2Z的影响,探讨通过干扰PI3K/AKT信号传导途径在鼻咽癌治疗中应用的潜在价值。
[方法]采用免疫组化SP法检测31例鼻咽粘膜慢性炎和33例鼻咽癌组织中PI3K、AKT、bcl-2的表达。应用wortmannin抑制PI3K的活性,以绘制生长曲线、MTT观察wortmannin对CNE-2Z细胞生长、增殖的作用;以免疫细胞化学分别检测wortmannin处理培养后的CNE-2Z细胞中PI3K、AKT和bcl-2的表达,RT-PCR检测wortmannin处理后的细胞bcl-2mRNA的表达情况,ELISA法检测wortmannin处理后的CNE-2Z细胞中的磷酸化的AKT的含量,流式细胞仪检测wortmannin处理培养后的CNE-2Z细胞的凋亡。
[结果]PI3K、AKT和bcl-2在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性率分别为16.12%(5/31),35.48%(11/31),38.71%(12/31);在鼻咽癌中的阳性率分别为84.85%(28/33),72.73%(24/33)和81.82%(27/33)。鼻咽癌组与鼻咽粘膜慢性炎组相比差异均有非常显著性(P<0.001)。在鼻咽癌中,PI3K和bcl-2的表达有显著相关性(r=0.501,P<0.005),AKT和bcl-2、PI3K和bcl-2之间均无明显相关性(p>0.05)。wortmannin对CNE-2Z细胞生长、增殖具有抑制作用,而且呈剂量依赖性。wortmannin作用后CNE-2Z细胞的PI3K和bcl-2的蛋白表达均减弱,而AKT的表达无明显变化。揭示wortmannin可以抑制CNE-2Z细胞bcl-2mRNA的表达。wortmannin能显著抑制磷酸化的AKT的表达,并呈一定的剂量依赖性。Wortmannin还可以诱导CNE-2Z细胞的凋亡。
[结论]
(1)在鼻咽癌中,PI3K、AKT和bcl-2均呈过表达,它们的过表达可能参与了鼻咽癌的发生发展。
(2)PI3K的抑制剂wortmannin可以有效抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长和增殖,并且呈剂量依赖性;从基因和蛋白水平抑制CNE-2Z细胞中bcl-2的表达,诱导CNE-2Z细胞凋亡;同时使磷酸化的AKT的表达降低。表明wortmannin可以通过PI3K/AKT信号传导途径抑制鼻咽癌细胞的增殖,诱导鼻咽癌细胞的凋亡。PI3K/AKT途径可能是鼻咽癌细胞增殖和抗凋亡的重要信号传导通路。
(3)wortmannin作为PI3K特异性的抑制剂,值得进一步研究,这提示PI3K/AKT信号传导途径阻滞可能成为今后鼻咽癌临床治疗的一个靶点。