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1型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type A1,DHAV-1)可使雏鸭患上高度接触性传染病,并以肝坏死、出血,高死亡率为主要特征。1周龄内雏鸭易感,死亡率高达95%,给我国的养鸭业带来了较大的经济损失。目前国内外对DHAV-1的研究主要集中在病毒基因组的测序和病毒的诊断技术等方面,对病毒的致病机理研究较少,为此本研究在建立雏鸭病毒感染模型的基础上,通过RNA-Seq技术,对DHAV-1感染过程中雏鸭体内的差异表达基因进行了测序分析,筛选出雏鸭感染DHAV-1的相关基因。本文主要研究结果如下:
4日龄雏鸭肌注DHAV-1,复制了鸭病毒性肝炎的模型,通过组织病理学和病毒PCR检测方法,验证雏鸭成功感染DHAV-1。采集DHAV-1感染后濒死期雏鸭的肝脏和脾脏,提取组织RNA,进行RNA-Seq,分析与处理,结果:感染组的肝脏、脾脏和对照组的肝脏、脾脏相比,共有7599个差异表达的基因,其中有3521个基因表达上调,4078个基因表达下调。通过cluster和Java Treeview软件,对感染组的肝脏、脾脏和对照组的肝脏、脾脏共表达差异基因进行了聚类分析,上调的基因大都成簇聚到一起,下调的基因分布比较分散。应用半定量PCR和荧光定量PCR方法验证了RNA-Seq测序得到的差异表达基因,结果表明所检验基因在mRNA相对表达量的改变倍数和表达谱测序中获得的差异表达结果基本一致,从而表明测序数据可靠性。
结论:DHAV-1感染雏鸭后,DHAV-1可能通过部分代谢基因表达下调从而抑制宿主细胞的新陈代谢,机体蓄积过多的代谢中间产物。雏鸭可能通过部分免疫基因上调表达抑制病毒在细胞内的复制,为进一步研究DHAV-1的致病机制奠定了基础。