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粘着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)是一个多功能的非受体酪氨酸激酶,它在细胞间及细胞与细胞外基质粘附中起关键作用,同时与细胞增殖、凋亡、迁移及血管形成等密切相关。作为细胞内重要的信号分子,FAK通过整合素、G蛋白偶联受体、酪氨酸激酶受体等多条信号传导途径广泛参与细胞的多种生物学过程,并参与肿瘤的发生、发展、侵袭与转移。已有研究发现FAK具有潜在的癌基因的特征,即促进细胞增殖、抑制细胞凋亡和诱导血管生成等功能,与某些恶性肿瘤的发生发展和预后密切相关。口腔恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病,其早期防治一直是口腔肿瘤研究领域的热点。由于口腔黏膜癌变是一个多阶段、多基因改变的积累和相互作用的过程,因此明确口腔黏膜癌变的分子机制,阻断癌前损害转化为浸润癌,是实现口腔恶性肿瘤早期防治的关键。4-亚基硝氧喹啉(4-nitroquinoline-1-oxid,4NQO)诱发大鼠舌癌模型,能较为真实的模拟人舌癌发生发展过程,进行口腔黏膜癌变早期的动态观察,是最常用的研究口腔癌的动物模型。因此本实验应用4NQO诱发大鼠舌癌的动物模型,动态观察FAK在口腔黏膜癌变中的表达变化,及其与细胞增殖、凋亡的关系,探讨FAK在口腔黏膜癌变中的作用。
目的:
1.明确FAK在大鼠舌黏膜癌变过程中的表达规律。
2.探讨大鼠舌黏膜癌变中FAK表达与细胞增殖、凋亡之间的关系。
方法:
1.4NQO诱发大鼠舌癌动物模型的建立:
42只雄性清洁级大鼠随机抽取10只作为对照组正常喂养,其余32只作为实验组0.004﹪4NQO(40 ppm)饮水避光喂养。诱癌第9、12、18和22周随机处死8只实验组大鼠和2只对照组大鼠。实验组分别切取目的组织及其邻近组织,正常对照组直接切取相对应的舌黏膜组织,收集标本后进行病理诊断并分组。
2.FAK基因转录与表达的检测:
提取总RNA,应用RT-PCR检测各样本fak转录水平,其结果进行图像分析并统计;免疫组化法(S-P)检测FAK蛋白水平的表达情况。
3.细胞增殖和凋亡的检测:
应用免疫组化法(S-P)检测组织中核增殖抗原PCNA表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dLITP缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡。
结果:
1.实验结束时共获得组织标本50个,经病理检查分为以下五组:正常对照标本10个、轻度异常增生标本13个、中度异常增生标本12个、重度异常增生标本7个、鳞癌标本8个。
2.RT-PCR显示异常增生组与正常对照组间fak转录水平无显著差异(P>0.05),鳞癌组fak转录水平显著高于其他各组(P<0.05);大鼠舌黏膜癌变中FAK蛋白表达呈递增趋势,各组间表达存在显著差异(P<0.05)。
3.大鼠舌黏膜癌变中细胞增殖指数(PI)明显增加,且各组之间存在显著差异;fak转录和蛋白表达与PI正相关(R=0.657,P<0.05;R=0.921,P<0.05)。
4.大鼠舌黏膜癌变中细胞凋亡指数(AI)及AI/PI逐渐降低,且各组之间存在显著差异;fak转录和蛋白表达与AI呈负相关(R=-0.581,P<0.05;R=-0.816,P<0.05)。
结论:
1.4NQO诱发大鼠舌黏膜癌变过程中,fak转录水平在鳞癌组中明显升高,蛋白表达随癌变进程而显著上调。提示FAK过表达是口腔鳞癌发生发展过程中的早期事件,FAK表达异常参与了口腔黏膜癌变的过程。
2.在大鼠舌黏膜癌变过程中,增殖细胞显著增加,凋亡细胞随之减少,FAK表达与细胞增殖和凋亡显著相关。表明FAK可能通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡而影响大鼠舌黏膜癌变进程。