目的本课题通过A549肺癌细胞筛选试验确定灵芝提取物的有效成分总三萜和多糖,将其作为研究对象,制备成具有增强免疫和抗氧化功能的灵芝滴丸,完成灵芝滴丸的处方前研究、提取工艺研究、成型工艺研究、质量标准研究、制剂评价和初步药效学研究。方法处方前研究：本部分首先以灵芝总三萜和多糖为指标性成分,建立灵芝有效成分的紫外体外分析方法；在此基础上考察不同来源的灵芝药材,分别以总三萜和多糖成分的含量为指标,确立灵芝药材来源。提取工艺研究：通过A549肺癌细胞筛选试验,确定灵芝提取物的有效成分总三萜和多糖；采用乙醇溶剂提取灵芝总三萜成分和水煎煮法提取灵芝多糖成分,分别以单因素考察结合正交试验法,筛选总三萜和多糖的最佳提取工艺。制剂成型工艺：通过大孔吸附树脂对灵芝总三萜的纯化富集,采用动态吸附解析法结合单因素考察对影响大孔树脂纯化总三萜的主要工艺进行优化,确定最佳工艺参数。在此基础上,以药效学试验和三萜含量为指标,运用MTT法实验考察未经纯化和纯化三萜提取物对A549肺癌细胞株的增殖作用,筛选出增强免疫作用最强的组分和最适作用时间及浓度,为制剂处方的研究奠定基础。通过对临床需求、药物性质和剂型特点等方面综合分析,确定滴丸剂型。在预试验基础上,以单因素考察结合正交试验法,研究灵芝滴丸的最佳制剂成型工艺。制剂质量标准研究：参照《中国药典》(2010版)规定,从性状、薄层色谱鉴别、丸重差异、溶散时限、含量测定等方面进行标准研究。初步稳定性研究：并按照临床质量标准及《中国药典》(2010版)规定的项目和方法；对三批滴丸样品进行影响因素考察和加速稳定性考察。初步药效学研究：以模型小鼠碳廓清实验中校正吞噬指数α为指标,同时考察其免疫系统的胸腺指数和脾脏指数,研究其增强免疫的能力；以模型动物血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量为指标,考察其抗氧化能力。结果本论文建立了灵芝提取物的体外分析方法,线性关系良好,精密度高,回收率符合测定要求,切实可行,在此基础上考察不同来源的灵芝药材中总三萜和多糖成分的含量,确立灵芝(茸)为灵芝滴丸的研究对象。灵芝最佳提取工艺：通过A549肺癌细胞筛选试验确定了灵芝有效成分为总三萜和多糖。总三萜的最佳提取工艺为加30倍量90%乙醇,加热回流(80℃)提取2次,2h/次。灵芝多糖最佳提取工艺：灵芝醇提后药材,加30倍量水,浸泡0.5h,水煎煮提取3次,2h/次。滴丸的成型工艺研究：本部分大孔树脂采用湿法装柱,总三萜的最佳纯化工艺为上样浓度为59mg/mL(按生药量计),上样体积为88mL,待吸附完全后,用3BV蒸馏水以2BV/h速度除杂；以4BV80%乙醇作洗脱剂,平行三次进行纯化工艺验证,结果可行。运用MTT法实验研究灵芝纯化三萜对A549细胞的增殖作用,结果可知未经纯化的总三萜和多糖成分对肺癌细胞的增殖抑制作用更强,作用48h抑制率可达47.68%。说明灵芝提取物三萜和多糖具有提高免疫功能的作用,此结果对后期的制剂工艺和药效研究提供了可靠的实验基础。滴丸最佳制备工艺为药物：基质=1：1.5,PEG2000:PEG6000=2:1,熔融温度80℃,管口温度30℃。连续制备三批灵芝滴丸样品,其外观圆整,丸重差异和溶散时限等指标符合滴丸项规定,薄层色谱鉴别方法专属性良好。紫外分光光度法测定灵芝滴丸中总三萜的含量不低于20mg/g,多糖成分含量不低于43mg/g,测定方法简便易行,精密度、重现性良好。通过对影响因素试验和加速试验获得滴丸稳定性的系统信息,确定药品的贮存、包装材料等相关条件,以提高药物有效成分的稳定性。初步药效学研究：成功制备了免疫功能低下的动物模型和氧化损伤动物模型,分别比较各试验组小鼠给药后的免疫指标和抗氧化指标,其给药组效果均较模型组有显著性差异。结论利用A549肺癌细胞试验筛选灵芝的有效成分,并结合滴丸制剂的优势,本课题将灵芝茸总三萜和多糖成分制备为滴丸,完成了处方前研究、提取工艺研究、制剂成型工艺研究及质量标准评价和初步药效学等内容的研究,为该灵芝滴丸的研制提供了可靠的质量控制方法,亦可为进一步开展药动学及产业化研究奠定坚实基础。