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菊花（Chrysanthemum×morifolium Ramat.）是我国的传统名花,同时也是世界上重要的观赏花卉之一。传统的育种方法受到物种自身基因限制,引入所需的外源基因很困难,采用植物转基因技术研究菊花育种方法避免了这一缺点,而且具有很高的经济价值和社会效益。花分生组织特征基因LEAFY的异源表达可以加快成花转变过程,使菊花花期提前。因此,利用基因工程技术导入LFY基因改变现有观赏性较高的菊花花期有重要意义。课题组的前期工作已经从甘菊（Dendranthema lavandulifolium）中克隆得到了LEAFY同源基因DFL,本文利用农杆菌介导的叶盘法将DFL用于菊花的转基因研究,研究成果如下:1.构建了含有DFL基因的植物正反义表达载体。选取pBI121为植物表达载体,通过Bam HI和SacI双酶切将DFL基因替换GUS基因,利用菌液PCR和双酶切的方法进行鉴定,成功构建了正义表达载体pBI121-CaMV35S-Sense DFL和反义表达载体pBI121-CaMV35S-Antisense DFL。并通过液氮冻融法将构建好的植物表达载体分别导入农杆菌C58C1中。2.建立了高效稳定的菊花品种的组培再生体系。采用课题组菊花资源圃中筛选出的中国传统菊花品种‘小林静’、‘棕红针’和‘小粉菊’为试验材料,使用70%酒精+1%次氯酸钠联合消毒方法对茎段外植体进行灭菌。通过外植体灭菌试验筛选发现,‘小林静’和‘棕红针’可以建立较好的组培体系。通过三因素两水平的6-BA和NAA激素浓度配比试验,对‘小林静’和‘棕红针’进行不定芽诱导分化试验。通过筛选试验,建立了适合传统菊花品种‘小林静’稳定的高效高频再生体系,分化培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.5mg/L,叶片直接诱导不定芽率为92.76%,且每个外植体平均发生不定芽个数为（2.3767±0.76）个。不定芽生根培养基为1/2 MS固体培养基。不定芽苗生根率均达到了100%。移栽采用高温灭菌的蛭石,穴盘培养,成活率达到90%以上。3.选择卡那霉素作为抗性选择压,选择羧苄青霉素作为抑菌抗生素。采用根癌农杆菌C58C1介导的叶盘转化法进行‘小林静’遗传转化试验,农杆菌浓度为OD600值范围为0.5～0.6,侵染时间为10min;侵染之后,将叶片外植体放入MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.5mg/L培养基置于28℃进行共培养,黑暗培养2d,之后转接至含有Kan10mg/L和Carb400mg/L的抗生素分化筛选培养基中,进行转化细胞的筛选试验。待长出抗性芽后转接至生根筛选培养基1/2MS+Kan20mg/L+Carb200～300mg/L进行培养,最终建立了菊花品种‘小林静’的遗传转化体系。4.通过农杆菌介导的菊花叶盘转化法对菊花品种‘小林静’、‘墨荷’和‘日切桃红’进行遗传转化试验。对1373个叶片外植体进行侵染试验,得到抗性芽64棵,转接至生根筛选培养基中经过多次筛选得到抗性生根苗20株。PCR检测结果表明:DFL已转入菊花当中,获得2个转化株系,分别为正义转化苗‘墨菊’和反义转化苗‘日切桃红’,转化率为0.14%。