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第一部分线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ和ⅡmRNA的表达与精子活力的相关性研究目的:比较线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)和线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ(COXⅡ) mRNA在正常精子和弱精子症患者精子中的表达差异,旨在探讨COXⅠ及COXⅡmRNA表达与精子活力及密度的相关性。方法:研究对象禁欲3～7天,手淫法取精液于无菌杯中,液化后行精液常规检查,收集活动力正常的精液(对照组,精子密度≥20×106 /ml,a级≥25%或a+b级≥50%)和弱精子症患者精液(弱精子症组,精子密度≥20×106 /ml,a级<25%a+b级≤40%)各26份,洗涤后收集精子,提取精子总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测COXⅠ,COXⅡmRNA的表达水平。结果: COXⅠ和COXⅡmRNA在正常精子和弱精子症患者精子中均有表达,与活动力正常的精子比较,弱精子症患者精子中COXⅠ(P<0.01)和COXⅡmRNA(P< 0.05)表达水平显著降低;两组精子密度与COXⅠ和COXⅡmRNA表达水平无明显相关性(r1=0.245,r2=0.029, P均>0.05)。结论:人精子COXⅠ和COXⅡmRNA表达减少是精子活力低下的原因之一;COXⅠ和COXⅡmRNA表达水平与精子生成无关。第二部分精子早期凋亡、线粒体膜电位、胞内活性氧及钙离子含量与精子活力的相关性研究目的:比较正常活力精子与弱精子症患者精子早期凋亡率、线粒体膜电位、胞内活性氧及钙离子含量间的差异,旨在探讨精子早期凋亡率、线粒体膜电位、胞内活性氧及钙离子含量与精子活力的相关性。方法:研究对象禁欲3～7天,手淫法取精液于无菌杯中,液化后行精液常规检查,收集20例活动力正常的精液(对照组,精子密度≥20×106 /ml,a级≥25%或a+b级≥50%)和30例弱精子症患者精液(弱精子症组,精子密度≥20×106 /ml,a级<25%且a+b级≤40%),标本经洗涤处理后分别行Annexin V-FITC/PI、JC-1、DCFH-DA及Fluo3-AM荧光染色,采用流式细胞术(FCM)分析两组精子早期凋亡率、死亡率、线粒体膜电位、胞内活性氧及钙离子含量。结果:与对照组相比,弱精子症组精子早期凋亡率明显增加(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.01),对照组及弱精子症组精子早期凋亡率与线粒体膜电位丧失率间呈显著正相关(r1=0.673,r2=0.749,P均<0.01);两组间精子死亡率、胞内钙离子及活性氧含量无显著性差异(P均>0.05)。结论:人精子早期凋亡率增加和线粒体膜电位降低是精子活力降低的重要原因;线粒体膜电位检测对预测精子早期凋亡具有重要的应用价值;精子死亡率、胞内钙离子及活性氧含量可能与精子活力无关。