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腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是一种调节体内能量代谢的蛋白激酶,在糖类和脂质代谢过程中起到关键作用。因此,AMPK信号通路已成为代谢性疾病的研究热点。本实验用朝药万年蒿中分离得到的13种单体化合物为研究对象,应用3T3-L1小鼠前脂肪细胞筛选了与金合欢素协同抑制细胞分化的单体化合物。3T3-L1前脂肪细胞用经典的“鸡尾酒”法进行了分化诱导实验,对分别处理相应剂量的药物后分化诱导的3T3-L1细胞进行了油红O染色分析和甘油三酯含量测定。实验结果表明,棕矢车菊素、金圣草素、芹菜素、芦丁和异鼠李素5种单体化合物与金合欢素具有协同抑制细胞分化的作用。其中,金合欢素和芹菜素的协同作用效果最好。因此,本实验选取了金合欢素和芹菜素,继续研究了这两种药物协同抑制3T3-L1小鼠前脂肪细胞的脂肪积蓄的作用机制。分别用相应剂量的金合欢素和芹菜素处理3T3-L1细胞96 h,进行分化诱导实验的油红O染色结果表明,与金合欢素(20 μM)、芹菜素(20μM)单独给药相比,同时给金合欢素(10 μM)和芹菜素(10μM)的细胞分化抑制效果更明显;油红O染色后,用异丙醇脱色,在540 nm处测定吸光度的结果表示,与单独给分化诱导液的组(DM组)相比较,细胞给分化液的基础上给金合欢素(20μM)、芹菜素(20μM)、同时给金合欢素(10μM)和芹菜素(10μM)时吸光度值分别降低到74.9%、76.0%、62.4%;同时,甘油三酯含量测定结果表明,与DM组相比较,金合欢素(20μM)、芹菜素(20μM)、金合欢素(10μM)和芹菜素(10 μM)联合给药组细胞中甘油三脂(TG)的含量分别降低到81.2%、82.4%和64.6%。金合欢素和芹菜素具有协同抑制3T3-L1细胞内脂肪积蓄的作用。Western Blot实验结果表明,金合欢素和芹菜素具有AMPK磷酸化作用,且同时给金合欢素(10 μM)和芹菜素(10 μM)的AMPK磷酸化作用大于金合欢素(20 μM)和芹菜素(20μM)单独给药。RT-PCR实验结果表明,与金合欢素(20 μM)和芹菜素(20 μM)单独给药相比较,同时给金合欢素(10 μM)和芹菜素(10 μM)时,脂肪合成基因:乙酰辅酶A羧化酶(Acety1-Coa Carboxylase,ACC)、固醇调节元件结合蛋白 1c(Sterol ReguLatory Element-Binding Protein 1c,SREBP1c)、脂肪酸合酶(Fatty Acid Synthas,FAS)、硬脂酰辅酶 A 去饱和酶 1(Stearoyl-CoA Desaturasel,SCD1)、激酶甘油-3-磷酸酰基转移酶(Glycerol-3-Phosphateacyl Transferase,GPAT)的基因表达减少;同样地,脂肪分化的两种重要转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPARy)及 CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer Binding Protein,C/EBP)的基因表达减少。综上所述,芹菜素与金合欢素可以通过AMPK/SREBP1c/PPARy信号通路起着协同抑制3T3-L1细胞脂肪积蓄的作用。芹菜素与金合欢素有希望应用于预防或治疗肥胖的保健品或保健品。