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本文在小试研究的基础上,对杜仲叶中生物活性物质的提取分离工艺进行了中间试验研究,并根据中试特点,对工艺条件进行了改进,确定了提取分离生物活性物质的中间试验工艺流程。研究结果如下:提取分离杜仲叶中有效成分的工艺流程为:60%乙醇→回流提取(80℃;2h/次;料液比1∶16,提取3次)→制备浸膏(浓缩,50℃真空干燥)→加水转溶(4次)→定容(浓度为0.46g/mL,调pH值2～3)→上XDA-6树脂柱→纯净水洗脱得到糖和京尼平苷酸→15%乙醇洗脱得到绿原酸(浓缩析出粗品→重结晶得到纯品)→60%乙醇洗脱得到黄酮→树脂的再生(多量醇少量酸碱法)。具体的操作要点如下:1.提取:在中试规模提取时采用加热回流的提取方式。将6kg杜仲叶放入50L反应器中,以料液比1∶16加入60%乙醇在80℃进行回流提取,提取时间为2h,提取次数为3次。合并提取液,过滤,浓缩干燥至浸膏状。所得的杜仲叶浸膏得率为39.78%,其中总糖含量为32.62%,京尼平苷酸含量为1.57%,绿原酸含量为6.42%,黄酮含量为6.82%。2.上柱:将浸膏用水转溶,过滤,浓缩至一定浓度定容(浓度确定为固形物质量为0.46g/mL),将其pH值调至2～3后上XDA-6树脂柱,所用树脂柱规格为Φ200×1500mm的层析柱,柱体积为29L。静态吸附8h后洗脱。3.洗脱:先用纯净水洗脱树脂柱,将水洗脱液分段收集,第1,2柱体积经浓缩干燥得总糖粗品,第3至第20柱体积洗脱液经浓缩后得京尼平苷酸粗品;再用15%乙醇洗脱绿原酸,将第1、2柱体积与后面8个柱体积的洗脱液分开收集浓缩得两部分绿原酸;之后用50%～70%乙醇洗脱总黄酮。经过XDA-6树脂分离后得到的总糖含量为50.35%,其固形物得率22.48%;京尼平苷酸含量为22.74%,其固形物得率为1.23%;绿原酸含量为32.06%,其固形物得率为3.97%;黄酮含量为29.89%,其固形物得率为4.44%。4.将再生后的XDA-6树脂按照上述的工艺方法,重复前面的步骤,取得再生树脂分离得到的杜仲叶中各有效成分的含量。再生树脂和新树脂分离得到的总糖、京尼平苷酸含量差别不大;而绿原酸含量则高于新树脂,最高可达46.35%,比新树脂高14.29%。由此可以看出XDA-6树脂再生4次后,仍然可以进行有效成分的分离纯化,能够达到反复利用,降低成本的目的。通过本中试研究证明此工艺是可行的,并且省去萃取这一步,使工艺路线更加简单。整个中试过程的物料消耗量为:提取分离6kg杜仲叶,需用XDA-6树脂20kg。用新树脂分离时,整个工艺过程消耗纯净水540L,95%工业乙醇80L,浓盐酸5L,氢氧化钠3600g;用再生树脂分离时,消耗纯净水330L,95%工业乙醇90L,浓盐酸5L,氢氧化钠3600g。根据中试研究结果,认为利用本工艺进行工业化规模生产是可行的,所需的生产设备简单,易实现,生产周期短。