背景；前列腺癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤，在美国，前列腺癌发病率位居男性恶性肿瘤第一位，死亡率位居第二位，在我国其发病率也呈明显的上升趋势。前列腺癌患者极易发生骨转移，尤其是在治疗过程中肿瘤发展为激素非依赖性后，几乎100％伴有骨转移。骨转移发生后，放射治疗、化学治疗等目前常规治疗效果差，且预后不良。因此研究与寻找抑制前列腺癌细胞的生长、增殖和转移的药物具有重要的临床意义。 祖国医学渊源流长，中医药资源丰富，中医药治疗恶性肿瘤历史悠久，许多中药发现具有抗肿瘤作用。随着肿瘤生物治疗、基因治疗、抗血管生成治疗的兴起，对肿瘤的现代中医药认识与治疗也逐渐发展起来。根据中医理论，结合现代研究，已经证明，多种中药对多种恶性肿瘤具有治疗作用，其中一些中药已被证明具有确切抗癌疗效，如氧化砷可以有效治疗急性早幼粒白血病(APL)。东亚钳蝎(中药名：全蝎)在我国分布广泛，在传统医学中全蝎有具有熄风定惊，攻坚蚀疮、破瘀散结、消除肿块的功效，现代医学证明其具有促进免疫功能、镇痛、降压、抗肿瘤等作用。蝎毒提取物(PESV)是从东亚钳蝎蝎毒提取的分子量在6000～7000的多肽成分，大量文献证明其对多种恶性肿瘤具有间接作用和直接抑制作用，我们以往的研究也证明其对S180小鼠肉瘤和H22小鼠肝癌具有明显的抑制作用，并具有良好的体内和体外抗肿瘤血管生成活性。但有关PESV对前列腺癌细胞增殖及对前列腺癌骨转移影响的研究目前尚未见文献报导，本实验通过体外增殖抑制实验与体内骨转移抑制实验，以试图证明PESV对前列腺癌细胞增殖的抑制作用、对前列腺癌细胞骨转移的抑制作用，以及可能的机理。 目的；通过蝎毒提取物(PESV)对激素非依赖性前列腺癌DU-145和PC-3细胞的细胞毒作用、对细胞周期的影响和对细胞周期蛋白cyclinE和p27蛋白水平表达水平的影响，以观察PESV对DU-145和PC-3细胞的增殖抑制作用；通过PESV对前列腺癌PC-3细胞裸鼠骨转移的实验研究、对Lewis肺癌细胞裸鼠实验性肺转移的实验研究及PESV对荷瘤裸鼠全血血流变学的影响，以探讨PESV对前列腺癌细胞实验性骨转移的抑制作用。 方法；1.PESV对激素非依赖性前列腺癌细胞生长与增殖影响实验采用噻唑蓝(MTT)法检测PESV对激素非依赖性前列腺癌PC-3和DU-145细胞的细胞毒作用，并根据吸光度计算各药物浓度的细胞增殖抑制率；流式细胞术检测观察PESV与顺铂干预后PC-3和DU-145细胞周期的变化；免疫组织化学法检测PESV干预后，细胞周期蛋白cyclinE和p27蛋白水平表达的变化。2.PESV对前列腺癌细胞骨转移抑制作用实验研究分三部分：PESV对裸鼠PC-3细胞骨转移的实验研究、PESV对裸鼠Lewis肺癌细胞肺转移的实验研究、PESV对裸鼠全血血流变学的影响。PESV对裸鼠PC-3细胞骨转移的实验研究方法如下：采用CM-DiI荧光染料进行标记PC-3细胞，通过尾静脉注射细胞于裸鼠体内，以建立前列腺癌细胞骨转移模型，并将动物随机分为四组：空白对照组、PESVA治疗组、PESVB预防组和阴性对照组，PESVA治疗组PESV皮下注射，浓度为0.3g/kg，自第6天始对裸鼠进行干预，PESVB预防组自尾静脉注射前3天始皮下注射PESV，其它同PESVA治疗组，以活体成像系统观察前列腺癌骨转移模型形成情况及PESV对前列腺癌细胞骨转移的抑制作用。PESV对裸鼠Lewis肺癌细胞肺转移影响的实验研究方法：尾静脉注射Lewis细胞于裸鼠体内，PESV干预方法同PESVA治疗组，观察其对Lewis细胞肺转移的抑制作用。PESV对荷瘤裸鼠全血血流变学的影响方法：对所有裸鼠皆进行全血血流变学分析，观察PESV对荷瘤裸鼠全血血粘度、Casson屈服应力等全血血流变学变化。 结果；1.PESV对激素非依赖性前列腺癌细胞增殖抑制实验：MTT结果显示，PBSV在浓度40μg/ml～100μg/ml时对前列腺癌细胞毒性作用明显(40μg/ml时，DU-145细胞抑制率(IR)为30.5％，PC-3细胞抑制率为33.1％，与阴性对照组相比，P＜0.05)，随剂量加大作用增大，浓度在200μg/ml时，100％抑制，呈明显剂量效应关系，DDP在2μg/ml时对DU-145和PC-3细胞增殖抑制率分别为32.3％和31.4％，呈剂量效应关系；流式细胞术显示，PESV(浓度为40μg/ml)干预后G0/G1细胞的百分比增多(DU-145细胞和PC-3细胞S期的比例分别61.8％和54.1％，与阴性组比较，P＜0.01)，S期的前列腺癌细胞减少(DU-145细胞和PC-3细胞S期的比例分别为34.1％和17.1％，与阴性组比较，P＜0.01)；但PC-3细胞PESV组在G2/M与阴性对照组没有差异。顺铂组DU-145细胞和PC-3细胞在G0/G1、G2/M、S与阴性对照组均非常显著差异(P＜0.01)。免疫组化显示，PESV(浓度为40μg/ml)干预后，DU-145和PC-3细胞cyclinE蛋白表达水平下调，p27蛋白表达水平上调，与对照组相比，有非常显著差异(P＜0.01)。2.PESV对前列腺癌细胞骨转移抑制作用实验：CM-DiI标记PC-3前列腺癌细胞良好，一般标记率在60％以上。尾静脉注射细胞30天后，活体成像检测系统显示，阴性对照型组90％裸鼠肩胛骨、骨盆、肋骨及胫骨显示有大量荧光团存在，空白对照组则未见发光团，证明前列腺癌骨转移模型成功。PESVA治疗组有4只裸鼠出现明显荧光团(与阴性对照组相比，P＜0.05)，PESVB预防组仅有2只出现(与阴性对照组相比，P＜0.05)，证明PESV可以抑制PC-3细胞在裸鼠体内形成骨转移，同时发现PESVB预防组发生骨转移裸鼠少于PESVA组，差异显著(P＜0.05)，证明PESV对前列腺癌骨转移有预防作用。PESV对裸鼠Lewis肺癌细胞肺转移影响实验显示，PESV组肺转移灶数是3.2±1.2，而对照组为13.5±5.3，有非常显著差异P＜0.01)。全血血流变学分析显示，前列腺癌荷瘤裸鼠与肺癌荷瘤裸鼠血流变学各项指标在PESV组和对照组中有显著差异，其中高切表观粘度、低切表观粘度、Casson屈服应力显著降低(与对照组相比，P＜0.01)。 结论 1.PESV浓度在40μg/ml～100μg/ml对激素非依赖性前列腺癌PC-3和DU-145细胞生长和增殖具有抑制作用。 2.PESV减少PC-3细胞在裸鼠骨骼形成骨转移灶，对前列腺癌实验性骨转移具有抑制作用。 3.PESV提前3天干预较尾静脉注射PC-3细胞后6天干预，有显著差异，证明PESV对前列腺癌骨转移形成具有预防作用。 4.PESV干预后，Lewis肺癌细胞在肺脏形成的转移灶显著减少，证明PESV对Lewis肺癌细胞实验性肺转移具有抑制作用。 5.PESV对荷瘤裸鼠全血血流变学参数有明显改善作用，尤其高切表观粘度、低切表观粘度、Casson屈服应力。