离心运动上调Scx提高Ⅰ型胶原合成促进慢性跟腱病修复的机制研究

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目的:慢性肌腱病的修复一直是运动医学领域的难点问题。本实验利用慢性跟腱病动物模型,研究离心运动对慢性跟腱病的修复作用,探讨其与Scx,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原等因素之间的关系,揭示离心运动促进慢性跟腱病修复的机制。方法:首先建立慢性跟腱病大鼠模型。36只8周龄SPF级雄性SD大鼠,体重200-250g,随机分为对照组、模型组、运动组,每组12只。对模型组和的运动组大鼠在右下肢跟腱进行慢性跟腱病造模。造模方法:2%戊巴比妥钠(0.2ml/100g)腹腔注射麻醉,下肢除毛,定位跟腱,向跟腱中部注射30ul使用PBS配置的Ⅰ型胶原酶(10mg/ml)。之后对照组和模型组常规饲养.运动组大鼠常规饲养15天后,开始接受离心运动干预。干预方法以动物跑台下坡跑的方式进行,运动强度为坡度-15°,15m/min,30min/d;每周3次,隔天进行,持续4周。4周后进行跟腱超声影像检查,之后处死各组大鼠,取材跟腱组织,进行大体观察,HE染色观察跟腱组织病理学变化,免疫组化和realtime-PCR检测COLⅠ、COLⅢ、Scx的蛋白和m RNA表达情况,Western blot检测COLⅠ、COLⅢ、Scx、MMP-2、MMP-9的蛋白表达情况。结果:1.大体观察发现,与对照组相比,模型组大鼠跟腱组织整体呈米白色,表面粗糙无光泽,组织增生、粘连严重。运动组大鼠跟腱组织色泽较白,有轻微增生及粘连,整体情况比模型组有明显改善。2.超声影像结果显示模型组与正常组相比,病灶局部回声信号欠均匀,超声图像紊乱无序;运动组与正常组无明显差异。3.HE染色结果显示模型组肌腱组织呈现胶原纤维排列紊乱,部分出现断裂情况,细胞增多,细胞核变圆变大,血管组织有较明显增生。运动组组织形态有明显改善,已接近正常肌腱组织。4.免疫组化结果发现,与对照组相比,模型组中Ⅰ型胶原蛋白的阳性表达明显下降,而Ⅲ型胶原蛋白阳性表达则明显升高,Scx蛋白围绕细胞核的阳性表达有所增强。运动组Ⅰ型胶原蛋白的阳性表达明显增强,Ⅲ型胶原蛋白阳性表达明显减弱,Scx蛋白阳性表达显著增强。5.m RNA表达结果显示,对照组与模型组相比,Ⅰ型胶原m RNA表达量降低,而Ⅲ型胶原m RNA表达升高,Scx的m RNA表达量有所升高。运动组Ⅰ型胶原的m RNA表达量比模型组明显升高,与对照组相当;Ⅲ型胶原m RNA仍高于对照组,但对比模型组大大降低;Scx的m RNA表达量显著高于其他两组。6.Western blot结果显示,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和Scx的蛋白表达结果与其m RNA表达结果趋势一致。MMP2和MMP9的蛋白表达量,模型组高于其他两组;对照组和运动组之间无统计学差别。结论:1.在本慢性跟腱病动物模型中,离心运动促进了肌腱组织的修复。2.离心运动通过上调Scx,提高肌腱I型胶原的合成,以促进慢性跟腱病的修复。3.离心运动促进慢性跟腱病修复的作用还可能与其调节细胞外基质中MMP2和MMP9的表达有关。
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