【摘 要】
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Survivin是近年发现的一个抑制凋亡的新基因.与其它IAP家族成员不同的是,Survivin只有一个BIR序列,C末端为一伸展的a螺旋而且在胞内以二聚体形式存在并呈周期性表达.Survivin
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Survivin是近年发现的一个抑制凋亡的新基因.与其它IAP家族成员不同的是,Survivin只有一个BIR序列,C末端为一伸展的a螺旋而且在胞内以二聚体形式存在并呈周期性表达.Survivin不仅可以抑制各种刺激引起的细胞凋亡,而且还参与细胞有丝分裂及胞质分裂的调节.尤为重要的是,Survivin在大多数肿瘤中特异性高表达,而在正常成体组织中几乎不表达.此外,Survivin的高表达常预示患者预后不良.因此,Survivin有可能成为肿瘤诊断及预后判断的一个重要检测指标.本实验的目的是利用杂交瘤技术制备抗人Survivin单克隆抗体,用免疫组织化学(IHC)方法检测肿瘤细胞株和组织中Survivin的表达.我们首先利用Survivin特异引物,通过RT-PCR从人乳腺癌细胞株MCF-7中扩增人Survivin分子的cDNA全长.将Survivin基因定向克隆于原核高效表达载体pMS-31b,转化大肠杆菌POP2136经42℃热诱导获得MS<,2>-Survivin融合蛋白.将融合蛋白分离纯化后,免疫Balb/c小鼠.应用常规杂交瘤技术,通过ELISA双筛,获得4株分泌鼠抗人Survivin单克隆抗体(Sn McAb)的杂交瘤细胞株.经检测其分泌抗体的亚型均为IgG1.以自制的Survivin McAbs采用IHC技术检测了HepG<,2>,Hela及MCF-7三种人类肿瘤细胞株以及胃癌(5例)、乳腺癌(5例)、肝癌(5例)、肺癌(5例)、胰腺癌(5例)和膀胱癌(5例)的石蜡切片,阳性率为100﹪.同时,我们还利用Survivin McAb对HEPG2及Hela细胞进行了western blot的检测.总之,本实验制备并鉴定了鼠抗人Survivin单克隆抗体并对Survivin在肿瘤细胞株和组织中的表达情况进行初步检测,为以后进一步研究Survivin奠定了基础.
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