香梨优斑螟（Euzophera pyriella）是鳞翅目（Lepidoptera）螟蛾科（Pyralididae）昆虫的一种,是梨树、苹果树等果树的严重危害昆虫。自新疆特色林果业迅速发展以来,香梨优斑螟对于果树枝干的蛀食,严重影响了果树长势和果实产量。性别决定基因对于害虫种群爆发与繁殖力密切相关,Doublesex基因位于性别决定系统的最底层,该基因通过可变剪切产生雌性特异蛋白DSXF、雄性特异蛋白DSXM,雌雄特异蛋白调控昆虫的性别分化、昆虫生殖器官的形成、昆虫的求偶行为、昆虫神经网络的发育等。为探究香梨优斑螟Epdsx基因的DSX蛋白、基因表达和基因功能,开展研究内容如下:1.香梨优斑螟Epdsx基因生物信息学分析通过NCBI网站的ORF Finder,对香梨优斑螟转录组中的Epdsx基因序列的开放阅读框进行分析。使用多种在线分析网站和软件,预测香梨优斑螟DSX蛋白的多种生理生化特性。借助DNAMAN和MEGA X软件进行氨基酸序列的多重比对、构建系统发育树。结果表明:Epdsx蛋白是具有有29个磷酸化位点的不稳定的亲水性蛋白质,其表面无信号肽和跨膜结构;Epdsx蛋白的二、三结构预测结果一致,都是以不规则的卷曲和α-螺旋为主;经过氨基酸多重序列比对发现,Epdsx蛋白与多种鳞翅目昆虫相似度高达91.55%,表明Epdsx蛋白具有很高的保守性;在同源性上,Epdsx与脐橙螟蛾（Amyelois transitella）和地中海粉螟（Ephestia kuehniella）组成一个分支,表明有较近的进化关系。2.香梨优斑螟Epdsx基因剪切模式研究通过PCR扩增和基因克隆,从香梨优斑螟中获得3种类型的转录本,分别编码非特异性、雌性特异性蛋白(Dsx F1)和雄性特异性蛋白(Dsx M1)。将Dsx M1蛋白和Dsx F1蛋白分别与14种鳞翅目昆虫进行氨基酸多重序列比对发现,Dsx M1蛋白和Dsx F1蛋白的氨基酸序列均与其它鳞翅目昆虫有较高的相似度,且具有DM domain、Dsx-dimer两个保守结构域;通过MEGA X软件构建系统发育树,结果表明:Dsx M1蛋白和Dsx F1蛋白均与脐橙螟蛾（A.transitella）处在同一分支,有较近的进化关系。3.香梨优斑螟Epdsx基因的表达谱分析通过实时荧光定量qPCR,对香梨优斑螟雌雄虫不同发育阶段和雌雄成虫不同组织部位的Epdsx基因表达量进行检测,以Tub作为内参基因。结果表明:在雌雄虫不同发育阶段,Epdsx基因在不同虫态均有表达,雌虫在蛹期表达水平最高,雄虫在成虫期表达水平最高;成虫的不同组织部位,雌、雄成虫Epdsx最高表达水平分别在胸部和翅、胸部;雌、雄成虫Epdsx最低表达水平分别在头部、翅。4.香梨优斑螟Epdsx基因的RNAi通过dsRNA显微注射技术,初步探索香梨优斑螟Epdsx基因的基因功能。试验证明,注射ds DSX对香梨优班螟雌雄幼虫的Epdsx基因的表达量都会产生影响,与对照组相比雌虫于注射后的12h时Epdsx表达量达到最低值0.31,雄虫于注射后的24h时达到最低值0.51,后均升高,但未达到Epdsx基因正常表达水平。