蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的,经由库蠓、伊蚊等虫媒介导传播的传染病,主要感染绵羊等反刍动物,引起病羊发热、消瘦,口、鼻和胃黏膜出现溃疡性炎症变化,给养殖业造成巨大损失,已被OIE列为法定通报性疾病。BTV易发生变异和重组,血清型众多,目前已发现27个血清型,我国于1979年在云南发现了首例BT,到目前为止我国已经发现了1、2、3、4、12、15、16七个血清型,遍布多个省份。BTV属于双链RNA病毒,基因组由10个分节段的双链RNA组成,共编码11种蛋白,包括VP1-VP7 7种结构蛋白和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a和NS4),其中VP7蛋白作为病毒粒子的内层衣壳蛋白,是一种群特异性抗原,在各个血清型中序列高度保守,在病毒的生命周期中起着重要作用。目前,国内关于BT的研究大多还停留在流行病学、防治和诊断等应用的方面,对于BT致病机理等基础性的研究还较少。蛋白质的相互作用在病毒生命周期中发挥着重要作用,研究VP7和宿主细胞蛋白的相互作用,对于明确VP7蛋白的功能及BTV的致病机理具有十分重要的意义。本研究首先将BTV VP7基因克隆到pGBKT7载体中,成功构建了诱饵质粒pGBKT7-VP7,并且通过检测pGBKT7载体中报告基因的表达情况,对质粒进行了自激活和毒性作用的验证,结果表明所构建的诱饵质粒无自激活作用,对酵母细胞也无毒性作用。然后,利用RNA提取试剂盒提取高质量的羔羊睾丸(LT)细胞的RNA,再利用SMART技术合成双链cDNA,并利用同源重组技术将cDNA克隆至p GADT7-Rec载体上,并转化入Y187酵母菌株,成功构建了LT细胞酵母双杂交cDNA文库。经过检测,结果显示,文库的滴度为8.1×108 CFU/ml,插入的ds cDNA片段为400-2000 bp,平均长度为1000 bp,文库重组率为100%。随后,随机选取一些克隆,对插入片段进行测序鉴定,结果显示与羊属基因高度同源,这些数据表明文库质量良好,达到了文库的基本要求。最后,将构建好的诱饵质粒p GBKT7-VP7转化入Y2H酵母菌株,然后与构建好的LT细胞cDNA文库进行酵母双杂交,对获得的阳性文库质粒的插入片段进行测序分析后,初步筛选出一些与VP7相互作用的羊属同源的蛋白。然后经过回转验证,最终筛选出46个宿主细胞蛋白,结果表明这些宿主细胞蛋白在酵母双杂交系统中与VP7存在相互作用。