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目的:通过观察细胞毒性药物多西紫杉醇和甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷分别及联合作用人前列腺癌PC3细胞株并检测其体外增殖、迁移、侵袭能力、细胞周期变化和细胞凋亡,初步探讨两药联合应用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外抗肿瘤效应。
方法:一、通过无染色及HE染色后光镜观察5-aza-2dc和DT单独和联合应用对前列腺癌PC3细胞株细胞形态特点的影响;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察5-aza-2dc和DT单独和联合作用于PC3细胞时细胞增殖能力的变化;通过划痕损伤实验观察5-aza-2dc和DT单独和联合作用于PC3细胞对细胞迁移能力的改变;通过细胞迁移实验观察5-aza-2dc和DT单独和联合作用对前列腺癌PC3细胞迁移和侵袭的抑制效应。二、利用Annexin V-FITC/PI双染色法和流式细胞术细胞周期实验检测5-aza-2de和DT单独和联合应用诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。三、所有资料应用SPSS13.0软件进行分析处理,以P<0.05作为检验标准。
结果:光镜观察显示:前列腺癌PC3细胞经不同浓度5-aza-2dc和DT单独或联合处理24h、48h、72h后,表现出不同程度的细胞皱缩、边缘毛糙、染色质凝集、嗜碱性增强呈蓝色或细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒、核膜消失、细胞体积缩小、凋亡小体出现。两药联合作用比同浓度单药作用大。
MTT法结果显示:不同浓度5-aza-2dc和DT单独及联合应用均对PC3细胞表现出较强的抑制作用(p<0.05)。DT对PC3细胞的抑制作用呈时间-剂量相关性,即随着药物浓度增加和作用时间的延长抑制率也增加(p<0.05)。而5-aza-2dc对PC3细胞作用随浓度增加抑制无明显增加,且其对PC3细胞的抑制率仅在前48小时内随时间的延长明显增加,48小时后随着时间的延长增加不明显(p>0.05)。联合用药组对比同浓度5-aza-2dc和DT单独用药组的抑制率有明显提高,结果有显著统计学差异(p<0.05)。表明联合用药对PC3细胞增殖的抑制效应大于单独用药的效应。
划痕损伤实验显示:1.0μ mol/L5-aza-2de和10-7mol/L DT单独及联合作用于PC3细胞后,随着作用时间增加肿瘤细胞迁移距离均低于对照组(p<0.05),联合用药组对细胞迁移的抑制作用较同浓度药物单独应用组较大(p<0.05)。
细胞迁移实验显示:1.0μ mol/L5-aza-2dc和10-7mol/L DT单独及联合作用于PC3细胞时细胞侵入下室的细胞数较对照组明显减少(p<0.05)。联合用药时侵入下室的的细胞数比同浓度的5-aza-2dc和5-aza-2dc单药组均有明显减少(p<0.05)。
Annexin V-FITC/PI双染色检测实验表明:1.0μmol/L5-aza-2dc和10-7mol/LDT单独及联合作用均能明显诱导PC3细胞凋亡(P<0.05),对照组细胞凋亡率为10.65±0.39%,1.0μ mol/L5-aza-2dc组细胞凋亡率为16.60±0.67%,10-7mol/L DT组细胞凋亡率为17.95±1.08%,联合用药组细胞凋亡率为22.98±1.18%,联合用药组细胞凋亡率较同浓度药物单独作用组明显提高(P<0.05)。
细胞周期实验结果表明:1.0μ mol/L5-aza-2dc和10-7mol/L DT单独及联合应用后与对照组相比,G0/G1期细胞均显著减少,G2/M期细胞均显著增多(P<0.05)。联合用药较相同浓度单独用药G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(P<0.05)。说明该两药物应用后细胞分裂阻滞在G2/M期,联合用药对细胞阻滞作用更明显。
结论:1、甲基化转移酶抑制剂5-aza-2dc和细胞毒性药物DT单独及联合应用均能在体外细胞水平显著抑制PC3细胞的增殖、迁移和侵袭作用,诱导细胞凋亡,使细胞停滞于G2/M期,两药联合的作用比各单药作用大;2、5-aza-2dc和DT联合作用于HRPC细胞具有协同作用,其联合使用是治疗HRPC理想方式,值得进一步研究。