基于肠道菌群调控肠动力探讨益肾清利和络方治疗CKD的作用机制

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zcktjbb
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目的:建立5/6肾切除大鼠模型,观察益肾清利和络方对5/6肾切除大鼠肾功能的影响;通过一系列肠动力实验,对比益肾清利和络方对5/6肾切除大鼠肠动力的影响。通过分析不同分组间5/6肾切除大鼠肠道菌群的差异,找到优势菌群,探究肠道微生态与CKD胃肠道症状、肠动力之间的关系,分析益肾清利和络方对肠道菌群的影响机制,从而推测益肾清利和络方改善CKD肾功能的可能作用机制以及CKD肠动力与肠道微生态之间的联系。方法:将24只SPF级成年雄性SD大鼠随机分为三组,每组8只,分别为假手术(sham)组、模型组(model)组、益肾清利和络颗粒(YQHG)组。用5/6肾切除术构建大鼠肾衰竭模型2周后,每日予sham组、model组0.9%生理盐水灌胃、YQHG组YQHG混悬液灌胃,共8周。观察大鼠的一般情况、体重、饮水、进食、粪便情况。通过结肠直肠排珠实验、首次排便实验、胃排空及小肠推进率实验测定大鼠胃肠动力的改变。检测大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN以评估大鼠肾功能。酶联免疫分析(ELISA)检测大鼠血清及结肠5-HT、血清及结肠Ach以及血清精胺。以及使用16S rRNA高通量测序法对大鼠肠道菌群进行检测分析。结果:1.大鼠一般情况:手术后,model组大鼠渐出现精神不振、毛色变暗、鼠毛蓬乱、牙齿变黄等情况,YQHG组大鼠亦出现,但相较好之。较之sham组大鼠,model组大鼠体重增长更多,YQHG组体重增长较慢。model组和YQHG组的饮水量均高于sham组大鼠,但model组饮水量增加明显(P<0.05),具有统计学意义。model组大鼠的粪便含水量比sham组低,YQHG组较之model组粪便含水量升高(P<0.05),具有统计学意义。各组大鼠24h粪便重量存在差异,YQHG组排便量明显高于model组(P<0.05),具有统计学意义。2.肾功能:YQHG组Scr、BUN及24h尿蛋白较之model组都有明显下降(P<0.01),具有统计学意义。YQHG组大鼠肾脏的肾小球及肾小管病变、炎性细胞浸润等病理改变较之model组都有所改善。3.肠动力:与sham组相比,model组的首次排便时间较长,YQHG组较短,存在明显差异(P<0.001),具有统计学意义。较之sham组,model组大鼠的结直肠推进力减慢,而YQHG组有明显优势(P<0.05),具有统计学意义。胃排空率在各组存在较大差异(P>0.05),无统计学意义。与sham组相比,model组小肠推进率较低,YQHG组较高(P<0.05),具有统计学意义。model组较之sham组,在血清5-羟色胺(5-HT)、结肠5-HT、血清乙酰胆碱(Ach)、结肠Ach以及血清精胺含量都有所下降;YQHG组较sham组,在血清5-羟色胺(5-HT)、结肠5-HT、血清乙酰胆碱(Ach)、结肠Ach以及血清精胺都上升(P<0.01),具有统计学意义。4.肠道微生物群:针对门(phylum)及属(genus)两个水平的肠道微生物群进行分析。model组大鼠的肠道菌群与sham组相比较,组成差异较大;YQHG组较之model组,与sham组大鼠的肠道菌群组成更为接近。尤其是门水平上的肠菌相对丰度及群落heatmap分析显示,与model组大鼠的肠道菌群组成存在部分细菌的明显区别,比如厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota)。在门和属的水平上,三组在组内相异度存在区别,组间也表现出差异:在门与属的水平上,model组的组内差异较之sham组小。在门水平上,YQHG组与model组、sham组相比,组内相异度大;在属水平上,YQHG组与model组相比,组内相异度大,而较之sham组,组内相异度小。在门与属的水平上,5/6肾切除术大鼠肠道内菌群多样性发生改变,而YQHG增加了门及属水平细菌的多样性。结论:1.益肾清利和络方可降低5/6肾切除术大鼠血清Scr、BUN,减少24h尿蛋白,改善肾小球及肾小管病变,延缓CKD进展。2.益肾清利和络方可促使ENS释放5-HT、Ach,增加排便量,提高粪便含水量,促进大鼠肠动力。3.益肾清利和络方可增加5/6肾切除大鼠肠道菌群多样性及有益细菌丰度,改善肠道微生态,促进5/6肾切除术大鼠肠道菌群恢复正常。
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