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多糖的生物活性的研究在近几十年已被人们广泛关注。其中,不同来源多糖的免疫调节和抗肿瘤活性是多糖研究的热点。南极细菌的胞外多糖是否具有免疫调节活性也开始受到人们的关注。本课题就一株南极嗜冷菌B-3产的B-3胞外多糖是否对RAW264.7细胞具有免疫调节作用展开研究。使用MTT法测定B-3多糖对RAW264.7细胞增殖的影响。结果表明,B-3多糖在一定浓度范围内能促进RAW264.7细胞的增殖,在低浓度时,促进增殖的效果更明显。另外,使用流式细胞仪检测B-3多糖对RAW264.7细胞吞噬FITC-dextran能力的影响,结果表明,B-3多糖在浓度0.2、2、20和100μg/mL时,均能提高RAW264.7细胞的吞噬能力,具浓度依赖性。分别使用格里斯试剂法(Griess reagent assay)和ELISA法测定B-3多糖对RAW264.7细胞或小鼠腹腔巨噬细胞分泌的一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNFα)和白介素10(IL10)的影响。结果表明,B-3多糖在浓度2、20和100μg/mL时,能够显著的增加RAW264.7细胞NO的分泌,也显著的增加RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞TNFα和IL10的分泌。Toll样受体4(Toll-like receptors,TLR4)的抑制剂TAK-242显著的减少了B-3多糖刺激引起的RAW264.7细胞NO的分泌,说明B-3多糖对巨噬细胞的激活和TLR4有着密切的关系。使用Western blot法分析B-3多糖刺激的RAW264.7细胞内NF-κB信号通路的变化。结果显示,B-3多糖明显的诱导IκBα降解和p65发生磷酸化,说明B-3多糖激活了RAW264.7细胞内的NF-κB信号通路。使用Transwell小室和Snapwell小室以不接触或部分接触的方式将B-3多糖刺激后的RAW264.7细胞和小鼠黑色素瘤细胞(B16)共培养,结果表明适当浓度的B-3多糖能够增强RAW264.7细胞对B16细胞的杀伤能力。使用实时荧光定量PCR在mRNA水平检测B-3多糖刺激后的RAW264.7细胞中Fas和FasL的表达。实验结果表明,B-3多糖能够减少RAW264.7细胞内Fas的表达并增加其FasL的表达。Fas和FasL表达的变化可能和部分接触共培养时更多B16细胞的凋亡存在联系。数字基因表达谱(Digital Gene Expression Profiling,DGE)检测B-3多糖对RAW264.7细胞基因表达的影响。结果显示,2μg/mL的B-3多糖的刺激导致RAW264.7细胞178个基因发生上调,242个基因发生下调。一氧化碳合酶Nos2(Nitric oxide synthase 2)和金属羧肽酶(Metallocarboxypeptidase D)这两个上调的基因能促进NO的合成。